早上，我刚开始上班，同事小李就急忙冲了进来，慌慌张张地道：糟了糟了，昨天进行的ELISA检测，全部都废掉了！
这般事情，我于实验室曾目睹过好多回。数据杂乱无章，标准曲线扭曲得仿若弯曲游动的蛇，复孔之间的差异大到令人难以置信。关键在于——要重新进行测量？样本已然全部用完了。
那个时候，我心里就这么想，倘若能够拥有一份避坑指南，在挑选盒子的时候，就避开那些坑，那该是多么好的事情呀。
为啥又是你翻车？
别急，先弄懂它在干嘛。
通俗来讲，ELISA是借助抗原与抗体这对如同“天生冤家”般的结合反应，再增添一个“信号放大器”也就是酶，将肉眼无法看见的事物转变为能够看见的颜色深浅变化，颜色越深便意味着目标浓度越高。
就这么个原理，但跑起来就没那么轻松了。
怎么挑不踩坑？
首先去看那检测类别的东西，像大分子的蛋白，举例来说细胞因子这类，要选择双抗体夹心法来进行检测；而针对小分子，比如说激素、代谢物这些，就得运用竞争法。
其次呢，是种属，还有样本类型以及灵敏度这方面。要是说明书上面表述为“已验证人、大鼠、小鼠的血清血浆情况”，那就千万不要自作聪明，直接将其应用在猪、牛、鸡或者其他基质之上，不然，由于不匹配，很容易出现问题的。
灵敏度并非越高即是越好，需查看你样本之中目标物究竟有多少，盲目地去追求高灵敏度反而极有可能给自己挖掘坑洞。
说句实在话，选盒选好了，后面就是少操70%的心。
实操有多酸爽？
我曾加入过一个同行群，群里吐槽ELISA的帖子多得能刷屏。有一回，某品牌试剂盒跑出来的显色特别淡，反复检查操作却没有问题，换了个品牌后立马就正常了，原来就是那批抗体的活性出现了问题。
得出的教训是：一定得把说明书阅读三遍，三遍呀！每一步的这项操作，虽说不嫌速度慢，然而可千万不能莽撞行事。
存在这样一种说法，即反复进行冻融行为会对蛋白活性起到影响作用——谁能说这不是如此呢？曾经有一回，我由于偷懒的缘故，将血清进行了三次反复冻融操作，最终蛋白浓度直接减少至原来的一半。
你得使用恒温箱来控制孵育温度！别以为室温看起来差不多，哪怕只差一两度，结果可就大不一样了——加样时枪头要垂直放置，不能产生气泡，因为起泡会对吸光度造成影响。
洗板堪称一个极大的坑，洗得不洁净，背景就会高，洗得过于狠厉，信号便会弱，将洗涤液浸泡足够时长过后，接着彻底拍干，然而又不能太过用力，这般活儿特别折磨人，手都要被拍肿了。
不是玄学，是细节
讲讲真实的事例，前些日子有个朋友送检了一批标本 ，费了好大的力气选用了进口品牌 ，成本高昂到令人恐惧万分 ，可重复性确实是相当出色的。还有另一家使用的是国产平价盒 ，灵敏度近乎于国际品质 ，节省了超过一半多的款项 ，数据基本上能够相互对照。
所以说也不是必须花大价钱。
另有一点极易被忽视：批次差异。本人曾经为图省事将两个批次的组分混合使用，结果标准曲线直接无法使用，——批次之间的CV差超过15%之后便再也不敢如此行事了。
每个批次，都得运用自身独特的标准曲线，千万别偷懒，去拿上一次的数据进行套用，否则自食恶果，坑害自己。
少走弯路，数据稳如老狗
想跑好ELISA，几点一定要记住：
选盒时仔细对好检测目标、种属、基质；
操作严格按照说明书来，加样规范别求快；
实在不会了就求救技术支撑，比瞎折腾强。
呈上一句令人内心刺痛却十足真切的话语：减少犯下一个细微之处存有差错的情形，便能够节省下三天用以重新去做的时长。
别致使你的样品、精力以及数据，于这一关卡被损耗。你们实验室在运行ELISA时遭遇过何种陷阱？拿起一盒东西，来检测数值便迅速上涨，选对了盒子，才能够让板子运行稳当。
祝大家在实验的漫长黑夜里，早日见到那条笔直上升的空间曲线。
