上一周，师姐过来找我借盒子，并非那样的盒子，是她实验室里的 ELISA 试剂盒用光了，新订的还在前往的路上，她的 96 孔板正等着加样，脸都变绿了。
我也经历过。
那场实验很快就要开展了，翻遍冰箱好不容易才找出两个礼拜之前用过剩余一半的板条，咬咬牙，取出来继续用，结果整块板的背景竟黄糊糊得好似隔夜的茶水，毫无意外地宣告失败了。
我现在冰箱里还贴着张便利贴，写着“用了一半的必须记日期”。
没办法，记性不好就得靠规矩。
怎么选？
在刚刚踏入实验室的那段时间 ，挑选ELISA试剂盒的衡量标准仅仅是 ，要去寻觅价格最为高昂的那款。毕竟是花费老板的钱财 ，所以心里不会有丝毫的心疼。
后来被导师叫去谈话了。
她讲，你瞧瞧，你每回都选购那个进口的大牌产品，单单一个盒子就朝着四五千的价位去了。而隔壁的王老师在实验室所使用的是国产的，两千出头，然而得出的数据同样能够用来发表文章。
我那时候嘴硬：贵的就是好吧？
导师没骂我，只说了一句：你能不能先看看说明书再买。
老实讲，在那段时期，压根儿就未曾认真细致地去瞧一瞧说明书。仅仅是了解到具备48T以及96T这两种不同的规格。
四十八吨价格便宜些，但倘若要去做标准曲线的情况之下，算上进行倍比稀释时所用到的孔位，那剩余下来的样本孔数事实上是很紧张的。
一块有着96个孔的板子，在铺好了标曲以及质控品之后，实际上能够使用的仅仅只有四五十个孔。
买过一回48T的，铺完标曲后发觉样本装不进去，又再次订购了一盒，不仅浪费时间，且两批试剂并非同一个批号，数据无法连接起来，那次真的是想死。
哪个牌子好？
问过师兄该买什么牌子。
师兄打了三个哈欠，说都差不多。
后来呀，我发觉他所讲的“差不多”，其意思是，只要你是通过正规途径买回来的，并非是从他人冰箱里借来的过期产品，并非是全程在常温状态下快递过来的，并非是你自行胡乱调配洗涤液的，那么基本上都是能够使用的。
但多指标检测那种盒子，我建议大家擦亮眼睛。
市面上存在一些盒子，它们宣称单个孔能够同时测量好几个指标，听起来相当美好。然而实际上，倘若你并非经验极为丰富之人，所做出的数据常常不尽如人意。这些指标之间，有的存在交叉干扰情况，有的呈现相互抑制状况，还有的具备竞争结合情形。
若你未曾做过预实验加以确认，并且文献中也不存在有人利用同样的盒子得出良好结果的情形，那么还是规规矩矩地使用单指标盒子。
保存是个大坑
不得不吐槽一下试剂盒的保存条件。
取得一个全新的 ELISA 试剂盒，将其开启查看，标准品管子上面标记着“-20℃保存”，检测溶液 A 所示亦是“-20℃”，96 孔板同样是“-20℃”，而洗涤液则为“4℃”，终止液放置随意。
我当初第一次拿到盒子的时候，直接整盒塞进4℃了。
先用着，后来察觉到标准品存在异样，这才去翻阅说明书，结果发现，标准品早就过了保质期，几千块钱就这样白白浪费了。
必须分门别类放。
标准品、检测溶液A和B、还有那个没开封的板子，一到手就得立刻丢进冻库。
放于冰箱冷藏的是洗涤液以及终止液，放置的地点有所更换，我在冻库门上张贴了一张纸条，纸条之上写着“标准品处于左边第一层”，不然每次寻找都需要花费较长时间进行翻找。
运输路上也要小心
还有一个事情必须说。试剂盒在路上跑的时候，运输条件是关键。
有一些商家，为了节省费用，选择寄普通快递过来，标准品在常温环境下放置了好些日子，等到手的时候，活性已经下降得差不多了。
做完实验，你费尽心力好不容易收场。结果发现标准曲线，其相关系数无论如何都到不了0.99。为此周折了一礼拜，却查不出缘由。最终换了一盒崭新的试剂盒，一切便恢复到正常状态了。
你说是你的问题还是试剂盒的问题？
我觉得双方都有问题。选择靠谱供应商很重要。
至少得问明白发货究竟是怎样进行的，冷链能否自始至终都予以保证，箱子当中有没有放置温度记录仪，别厌烦多问，多询问几句能够在后续省去许许多麻烦。
物流中断过吗？
提及这个的时刻，我回想起上一年存在着一段时期，进口的试剂盒无论如何都无法进来。海关清关排队耗费了将近一个月的时间。
有好几个课题组在我们的实验室当中，争抢着那数量有限的存货，老板万分着急，每日都打电话去催促，后来有一位老师实在是等不得了，更换成国产的来尝试。
结果发现也没差多少。
反而供货稳得多，三天就送到了。
省钱的代价
去实验室来了个才来的师弟，为了能省为老板节省经费，在网上购买了一个不清楚到底是什么品牌的ELISA试剂盒。
包装盒上字都是模糊的。
他跟我说才900块钱，反复跟我确认“应该能用吧？”
我说你自己看着办。
那结果究竟如何呢。所做出来的OD值全都在0.1这个数值附近有所浮动，标准品在不同梯度时所呈现情况完全无法有效区分开来。阳性对照以及阴性对照所对应的OD值大体接近几乎没什么差别。整个板子呈现出来的状态就如同一块空白的板子一样。
他问我怎么回事。
我说你觉得呢。
有些事情不能省钱，有些坑必须自己踩过一次才知道疼。
最不好用的设计
我特别烦那种浓缩洗涤液要自己稀释10倍的盒子。
并不是讲我不具备稀释的能力。而是在每一回进行稀释操作之际，总会存在这样的情况，有人会这般询问：那个原液你可有将其充分摇匀？用于稀释的水究竟是蒸馏水呢还是双蒸水？pH值是不是需要作出一下调整？
在那之后，我变得机灵些了，不论盒子里头的洗涤液需不需要自行调配，反正我都会亲自再去配制PBST，将Tween - 20的浓度把控在大约0.05%这样的程度。
省得跟同门商量来商量去。
加样失误
再说一个加样时候的细节。
那个96孔板的孔眼着实是非常小的，在你进行加样操作的时候，要是稍微有那么一点点走神，那枪头就会戳到孔壁上去了，要么加多了，要么加空了，就是这样的情况。
加样之际，我向来都不会去看手机。并非是讲我自身具备自律的特质，而是在经历过翻车两次之后，我实实在在是增长了记性呀。
某一回，在添加完底物之后，察觉到某一个孔的颜色格外深，随后经过追溯得知，是那个孔在之前遭受了二抗的污染。在洗板之前的二抗孵育环节当中，加样枪头没有更换彻底。
从那以后每次加样之前我都检查枪头。换新的。不多想。
孵育温度不能乱来
还有那个37℃孵育。
我们实验室里的恒温箱，其温度不太准确，我用温度计测量过，设定的是37℃，可是实际温度在35℃到39℃这个范围之间波动。
这对于ELISA来说是不能接受的。
往后，我购置了一个体积较小的恒温水浴锅，它是特意用于做ELISA孵育的，板子需要放置于其中，并 float 在里面，相比恒温箱而言，其稳定性要高出许多。
尽管在每次进行孵育这个操作之时，都需要谨慎留意不去让水溅落到孔当中，然而数据的重复性相较于之前好了太多了。
个人经验，仅供参考。
空白孔背景高怎么办
要说最让人崩溃的，就是空白孔的OD值死活降不下来。
明明什么都没加，读数愣是0.3以上。整个实验的背景都飘了。
清查之后不外乎几个缘由，洗板洗得不够洁净最为典型，洗涤液未配制妥当亦是常见状况，底物液发生变质也会如此，另外封板膜未贴严实，在孵育进程中液体出现蒸发，进而板子边缘的孔位遭受污染。
现在养成习惯用多通道移液器洗板。每次洗涤都保证每孔加满。
将其洗净过后进行拍干之际，于吸水纸张之上多次进行拍打，直至拍到连自身都已丧失信心之时而后持续拍打。
其实也没有那么可怕
写了这么多，好像都在吐槽。
然而实际上，我对ELISA试剂盒怀有那种难以确切说清道明的情感。于实验室中度日这些年，最为熟稔的实验便是这个。被重复次数最多的同样是它。
忙碌之际，一日要跑三块板子，于超净台跟前，持续加样三四个钟头，腿部站至发酸，次日依旧得接着如此。
有时在进行着相关操作的时候，兴致就慢慢地消退，进而变得烦躁起来了。然而当瞅见自己所绘制出的标准曲线的R²取值为0. 998时 ，内心又油然觉得一切付出都是颇具价值的。
这 ELISA 试剂盒呀，就如同做饭时所用的油盐酱醋那般，优质的食材得依靠优良的调料才能够烹制出美妙的味道，然而要是缺乏精湛的厨艺，即便调料价格高昂那也是徒劳无功呀。
一点真心话
说了这么多，其实就想说一件事——
ELISA试剂盒只不过是一种工具，关键的是进行实验的人，不要因为是进口的产品就无理性且盲目地坚信其不会出现差错，也不要由于是价格低廉的国产货就认定它必然靠不住。
你所抉择的品牌是什么，你所挑选的规格是怎样的，你所采用的保存方法是什么。每一个步骤都对最终的结果产生着影响。并没有能够快速达成的路径可去遵循。然而也并非是那般令人恐惧的。
当前，每当于购置新盒子之前，我均会向供应商询问若干问题，具体涵盖何种温度予以保存，运输选取何种物流方式，批间差大致为多少，说明书是否存有最新版本。
问得多了，对方有时候也会烦。但总比买到不合适的东西强。
做实验的人嘛，谨慎一点总没错。
希望大家的实验都能一次过。少走弯路。少翻车。
