养细胞这事儿吧。
在当年，我头一回接触到山羊原代细胞之际，真心觉得自己已然掌握方法了。毕竟，养过小鼠细胞的，也养过人细胞的，变更一个物种又能有怎么样巨大的差异？然而，最终，接连三批细胞都全部死掉了。就在那个星期，我面对着显微镜，恍惚感觉山羊正瞪大双眼盯着我。
真的，羊的细胞比想象中娇气。
山羊原代细胞为什么这么难养
核心问题就一个：它不属于你熟悉的那些模式动物。
放置实验用品的房间内，众多人员都在饲养小家鼠、褐家鼠、穴兔，用于实验的试剂、微生物生长的培养基、利于细胞培养的消化液，全部都是针对这些动物优化而来的。你带上同一套既定的方案去开展山羊相关的实验工作，这情形就如同给猫投喂犬类食用的食物一样——从营养角度来讲或许并不缺乏，但就是呈现出一种不恰当的状况。
并且，山羊原代细胞自身就极为“执拗”，它不像肿瘤细胞系那般具有耐受性，消化时长只要稍微延长些许，细胞便会直接呈现崩解状态给你看，血清批次一旦更换，它就不再生长。众多人将其养死了却全然不知问题究竟出在何处。
消化时间到底该怎么控制
当初我针对这个问题进行了无数次搜索。网上提到“胰酶消化限定在2至3分钟”，然而那仅仅对小老鼠起到作用而已。山羊具备更为致密的组织，其细胞外基质也是存在差异的，在相同的时长之下，你大概只是消化下一层皮罢了，真正的细胞仍旧在组织块之中留存着。
我的建议是——别卡时间，看状态。
将培养皿放置于显微镜之下，去观察细胞边缘开始呈现变圆、发亮的状况，细胞彼此之间出现了缝隙之时，这时候当即终止实验。有可能是3分钟，也有可能是5分钟。每一个批次都存在着差异，不要去相信什么标准流程。
用什么培养基才能养好
这愈发让人心里刺痛了。在市面上所存在的培养基，其标签明示了“符合多个种类哺乳动物细胞的使用条件”，实际上默认的仅仅是鼠类或者人类。山羊细胞这一类型，对于一些特定氨基酸的需要情况，以及对于渗透压的敏感程度，均存在差异。
最省钱之法为：以高糖 DMEM 作基础，而后自行去调配。诸如将谷氨酰胺浓度予以提高些许，增添些非必需氨基酸。我曾见有人于培养基里直接添加 10%的山羊血清，其效果相较于胎牛血清更佳——当然，条件是你能够获取到洁净的山羊血清。
要是不打算进行折腾，那就径直去购买专门针对反刍动物细胞培养所制作的试剂盒，虽说价格会贵一些，然而却能让人省心。
传代时机怎么判断
养原代细胞最怕的就是“等”。
你觉得它尚未长满，再多养一日看看，结果次日一看，细胞开始出现分层状况，老的细胞紧紧贴附难以分离，新的细胞没有可附着之处，整个培养皿里混乱得如同煮成一锅粥的状态，此时你再进行消化操作，怎样都无法将其消化下来。
当覆盖率处于80%-85%之际，才是山羊原代细胞的最佳传代时机，千万别等到覆盖率达到100%的时候。也不要等它生长得特别均匀之时——要是有些地方显得密集，而有些，地方还较为稀疏，那就依据密集区域来计算覆盖率。一旦密集区开始呈现出细胞重叠的情况，就得立刻进行传代。
冻存和复苏要注意什么
有关冻结保存液制剂的配方属于一个反复被提及讨论的问题，然而山羊的细胞对于二甲基亚砜可是极其敏感的，要是其浓度过高就会直接对细胞膜造成损害，我曾尝试10%的二甲基亚砜，在复苏之后细胞的存活比率没有达到六成，当把浓度降低到7.5%时，细胞的存活比率能够达到八成以上。
那么，在进行冻存操作之际，千万别存有偷懒的念头。梯度降温这一方式最好是去做一下，或者选用程序降温盒来处理。而那种把细胞直接扔到-80℃的做法，山羊细胞是承受不了的。
在进行复苏操作时，迅速进行融化这属于大家都知道的常识，然而千万不要忘记，在融化完成之后要马上使用完全培养基去进行稀释，接着通过离心的方式把DMSO给清洗掉。绝对不能让它处于高浓度的DMSO环境中浸泡着，哪怕仅仅多浸泡一分钟都会致使一批出现死亡。
原代细胞来源怎么选
这个问题很多人都忽略。
有人于屠宰场进行取样，然而时间拖延得实在太久，致使组织已然缺血缺氧长达好几个小时，之后拿回来所分离出来的细胞，其活性极其差。最为理想的乃是活体取样，又或者在动物处死后30分钟之内达成取样。
何况部位也是相当关键的。同样是肾脏，皮质与髓质的细胞特性的差别是许多的。要是你所需要的是特定类型的细胞，像是山羊肾上皮细胞，在取样的时候最好仅仅取皮质那一层，不要把髓质掺和进去。
其实没那么玄
说这么多，可能会吓到你。
然而，饲养山羊原代细胞这件事，讲起来难不难呢，说容易也不容易。关键之处在于，千万别将其当作“普通细胞”来饲养。它在诸多细微之处，与小鼠、人都存在区别，你必须把它视作一个有个性的生物，依照它的习性去对待。
一旦摸透了它的脾性，后面就顺了。
之后我养的那批细胞，养到了八代，其状态一直都很不错。重点在于，它为我提供了好多数据，那些数据是实实在在属于山羊的，并非是从小鼠那里推导出来的。
这就值了。
