说实话，我刚入行那会儿，看着那堆抗体名字就头疼。
有着CK7、CK20、TTF - 1、Napsin A等，这一连串的字母组合，仿佛是在背诵密码本一般。更让人感到崩溃不已的是，明明是同样的名称，然而不同厂家所呈现出来的效果却相差得极为离谱，有的染出来之后漂亮得好似艺术品一样，有的却仅仅只是呈现出一片均匀的褐色，没错，那是背景色，什么都根本看不清楚。
我知道你也在烦这个。
花钱了，耗费时间了，然而片子弄出来却没法观看，还得重新再来。样本就只有那么一点儿，折腾几回就没有了，老板的脸色也逐渐变得越发难看。这种痛苦，做过免疫组化的人都是明白的。
怎么知道这个抗体到底好不好用
这个问题我问过好多前辈，得到的答案大多是“多试试”。
但试错成本太高了啊。
后来呀，我从中发觉 ，有那么一种相对较为具备实用性的办法，可通过查看文献里头的染色图来达成，需留意哦，并非要去查看充斥于文章主体部分之中被挑选出的那般图样，而是应该去查看附件那里的、作为补充性质的图样，原因在于那里呈现的染色效果常常会显得更为真实，借助它能够瞧出抗体所处的真实形态水平。
另有一个更加直截了当的办法，去询问从事病理诊断工作的资深医生。他们所经手处理的片子在数量上远超我们所食用过的米饭，对于哪一种抗体在何种组织上呈现出怎样的表现，心里有着极为清晰明确的认知。尽管他们说不定讲述不清楚什么克隆号码、什么工艺的具体内容，然而“这个好用”这三个字，相较于任何宣传都具备更强的说服力。
不同组织类型该用哪个克隆号
这个问题坑了不少人。
我曾目睹有人运用兔单抗去对小鼠组织进行染色，然而最终非特异性染色到处都是。我还曾见到有人将小鼠单抗应用于人组织上，其效果居然还不错——这件事情全凭运气。
然而从整体上来进行讲述，具备同源性的那些抗体，在同种类的组织之上展现出来的效果会更好些。举例而言，若是针对人组织那么就应用人源化抗体，或者最低限度起码是那种交叉反应已经得到验证的。
几个常见的坑：
染石蜡切片的抗体，与染冰冻切片的抗体，二者不能混用。存在这样一些抗体，其中一部分只认经过石蜡处理之后的抗原表位，而另外一部分只认天然状态的。
修复方式同样是相当要紧的，存在着这样的情况，部分抗体是需要借助高温高压来进行修复的，而另外一些抗体仅仅只需通过蛋白酶K消化即可，要是弄颠倒了那可就等于白忙活一场了。
并非稀释比例越高便越好，我曾目睹有人出于省钱之目的，将抗体加以稀释，竟达到了1:10000的程度，最终致使阳性信号全然消失不见。
买回来之后怎么验证它是不是正品
某次，购置了一批声称为进口的抗体，其包装正规，标签正规，说明书也正规，然而染出的效果却不对劲。随后经查询，得知是贴牌的仿冒品。
怎么避免？
查看批号，对于正规厂家而言，其批号在官网是能够查到生产记录的，生产记录涵盖克隆号、纯化方式以及保存条件，若查不到的情况，那就一律当作假货来进行处理。
去进行质控操作 ，每当有新的抗体到货之时 ，首先使用已知的阳性样本予以测试。假设出现的效果和之前所使用的正品不相符 ，那么就坚决果断地进行退货处理。
着眼于保存状况，当抗体抵达之后，查看液体是不是清澈的，有无絮状的物质存在，有无沉淀物。要是在运输进程里冷链中断了，那么抗体也许已然失去活性了。
怎么判断染色结果到底对不对
这个问题最核心，也最让人头大。
有人将并非专指特定的那种染色当作呈现阳性质态的信号，有人却就真正称得上阳性的情况当作处于背后的景象从而不予重视疏忽遗漏了，怎么去进行判别断定呢？
首要看位置，确切来讲，真正的阳性信号应当处于细胞核、细胞质或者细胞膜之上，其位置精准无误。要是整个细胞呈现一律着色的状况，又或者间质也进行了染色，此种情形下大概率属于背景。
其次要看那种强弱梯度情况，好的染色结果应当有着梯度变化存在，强阳性的细胞所呈现颜色要更深些，弱阳性的细胞颜色相对浅些，阴性的细胞则是完全不会进行着色，要是所有细胞全都染成同一颜色，要么属于抗体浓度过高这种状况，要么就是阳性信号被背景给淹没掉了。
其三是要与H&E进行对照做比较、同一组织开展了H&E染色、它能够助力判别组织架构、借此得知哪些区域属于肿瘤范畴、哪些区域为正常组织、如此一来在查看IHC结果之际便会更具信心做准备、。
抗体保存到底该注意什么
这个问题看似简单，但做错的人特别多。
抗体的第一号致使因素是反复冻融，每次从冰箱取出解冻，都会使抗体结构产生一定程度的损害，因此，买回来的抗体最好分装成小份，一次使用一份，剩余部分不要反复冻融。
经过稀释的抗体是不可以长时间放置的，许多人有着把稀释好了的抗体放置于4度冰箱之中，间隔两天之后继续去使用的习惯。然而稀释过后的抗体其稳定性是会有所下降的，最好是在当天进行配制并且当天就使用。
有的抗体对光敏感，长时间处于光线之下会失活，要注意避开光线，尤其是荧光标记的抗体，必须避光保存。
哎，写着写着又想起以前踩过的坑了。
刚入行那会儿，啥情况啥门道完全不清楚，心里觉着抗体这玩意儿都没啥差别，选便宜的买就成。可真把买的抗体用于染片子后，那呈现出来的结果，连自己都不好意思拿给老师瞧了。之后挨了几次骂，才逐渐慢慢弄明白该怎么去看说明书内容，该如何挑选克隆号，又该怎样实施质控步骤。
去做免疫组化这个事儿，讲难的话它确实难，讲简单的话它又着实简单。重点在于不要害怕出现差错，然而相同的失误不能犯上两次。
那抗体这种物质，真的是有着一分钱对应一分货这样的情况。由于便宜就不会有好的品质，所以这个道理在免疫组化这个领域是特别适用的。
就拿这事儿来讲，并非是价钱越贵便越好。重点在于寻找到契合你实验体系的抗体。他人使用起来效果良好的，到了你这儿未必就好，这情况是极为平常的。缘由在于你的组织处理办法、固定时长、抗原修复状况都有可能是不一样的。
所以，多试、多看、多记，这是选抗体的不二法门。
最初的时候，或许会觉着麻烦，然而，等你寻觅到那所谓的“黄金组合”，染制出来的片子呈现出清晰且漂亮的状态，当诊断医生一眼便能够瞧出结果之际，你会发觉，先前所有的试错都是颇具价值可言的。
写这些的时候，我也不知道能不能帮到你。
然而要是你同样正为挑选抗体这件事而感到苦恼，期望你能够明白——你并非是独自一人。差不多每一个从事免疫组化工作的人，均经历过这个时期。挺过去便没事了。
