你花了几千块，结果还不如不测
进行实验的那些人, 均会遭遇这般崩溃之时, 空白孔飘移得极为离谱, 标准曲线如同心电图那般, 复孔相互之间差值达到两倍之多。
然后你开始怀疑自己的手，怀疑移液枪，怀疑人生。
话说回来, 你可曾静下心来思索一番, 实际出现状况的, 或许并非是你, 而是你手中所握着的那盒用于小鼠的ELISA试剂盒。
你确定你买的是正经货？
这事说起来有点难堪，但真得说。
当前市面上存在着数量众多的试剂盒, 其包装在花样方面呈现出一个比一个更为繁复的态势。当你开启淘宝并输入“小鼠ELISA试剂盒”进行搜索时, 会得到几百个相关结果, 这些结果所对应的价格区间跨度极大, 从八百到八千不等, 夸张得超乎想象。
便宜的那种吧，你敢用？贵的吧，买回来也未必靠谱。
之前, 我们实验室踩过坑。有个牌子主打“进口分装”, 其说明书印得如同盗版小说, 字是模糊的。做了三批, 数据全废, 老板骂了我一星期。
为什么你的标准曲线老是不成线
这个问题，估计每个做过ELISA的人都问过自己。
后续我弄明白了这样一件事情: 标准曲线未能正常跑出来, 其中百分之八十的责任应当由试剂盒来承担。
抗体呈现出不行的状况, 或者包被所采用的浓度是不正确的, 又或者封闭液当中存在着过多的蛋白杂质。这些情况你依靠肉眼根本是无法看出来的, 一直要等到进行上机读数的时候才会知道已经糟糕至极了。
另外就是，存在这样的情况, 有些厂家出于降低成本的目的, 所采用的抗体, 会和样本当中的其他蛋白产生交叉反应, 你所检测的是IL - 6, 然而结果却是人家顺带把IL - 10也检测出来了, 如此一来数据怎么可能不出现波动呢?
样本处理这步，很多人根本没走对
一提及此, 我必须要进行一番坦白。以前我一直认为是自身操作存在着问题, 每一回做产生的结果欠佳, 便竭尽全力去调整自己的流程。
后来才发现，小鼠血清样本这玩意，本身就很麻烦。
溶血了不行，血脂高了不行，反复冻融更不行。
可是质量优良的试剂盒会将这些问题纳入考量范围之内。说明书当中写得明明白白, 样本应当如何进行处理, 应当稀释多少倍数, 应当在何种条件之下予以保存。
差的试剂盒呢？就一句话：“按常规方法处理”。
常规方法是什么方法？大哥你倒是说清楚啊。
一个细节暴露试剂盒的良心
我现在挑试剂盒，会专门看一个东西——标准品的复溶说明。
值得信赖的厂家, 会向你详尽告知采用何种液体进行复溶, 需静置多长时间, 以及是否要进行温和摇晃。部分厂家甚至会直接为你配制好合适的液体, 你只需将其添加进去即可。
那种随便写一句“加1mL蒸馏水”的，基本可以拉黑了。
除此之外, 留意观望酶标抗体的稀释液构成成分, 质量优秀的厂家会采用专门特制的蛋白稳定液, 质量欠佳的厂家则直接取用PBS并掺和些许BSA来蒙骗你。
这些细节，说明书里看得到。
省钱和省事，你只能选一个
事实上, 我深知实验室所面临的预算方面的压力。老板日复一日地叫嚷着要节约, 采购之时对价格的比较, 如同那般买菜的大妈一样做派。
但ELISA试剂盒这个事，真的不能省。
价格低廉的试剂盒, 你兴许省下了五百块钱, 然而却浪费了两周的时间, 以及几十个样本还有你的那份耐心。最终数据无法达标, 导师不予认可, 期刊也不予以收录, 只能重新做一遍。
价格高昂的试剂盒, 一盒要两千多元, 然而一次就达成成功的结果, 所获取的数据极为漂亮, 将文章投递出去后, 审稿人对此无话可说。
你算算哪个划算。
那到底怎么选
我没有哪个牌子要推荐。我只想说几个挑的时候该看的地方。
察看标准曲线的范围, 质量优良的试剂盒、其检测的范围较为宽广, 并且线性表现良好, 质量欠佳的试剂盒、或许范围狭窄得超乎常理, 又或者在高浓度一端直接呈现饱和状态。
察灵敏度, 部分厂商所标灵敏度为0.1 pg/mL, 然而实际操作得出的结果, 连1 pg/mL都难以精准测量, 最好查看是否存有第三方验证的数据。
查看交叉反应列表, 正规的试剂盒会将与哪些类似蛋白不存在交叉反应罗列出来, 若未被列出来, 那你心里便需要打个问号。
瞧瞧售后情况, 看看是不是有些人能够回应你的技术方面的问题, 并非是那种“亲亲, 我帮你向技术方面询问一下哦”的情况, 而是实实在在懂得ELISA的人。
最后说句实话
写这些, 并非是要去制造焦虑。实验向来就不是简单之事, 饲养小鼠有着诸多麻烦之处, 收集样本也异常地费劲, 辛辛苦苦好不容易才积攒了一批, 然而却因为试剂盒出现了状况, 着实是不值得。
下次再度去购买小鼠 ELISA 试剂盒之时, 别单单只是去看价格以及销量了。去瞧瞧说明书当中那些细节之处, 去问问技术支撑方面的深浅程度, 去问问曾经使用过的人有着怎样的感受。
花点时间做功课，比花几周做废实验，划算得多。
