这么多年来, 我一直从事这一行, 真的, 随着工作时间的增长, 越发感觉到——存在着某些事情, 只有你亲自经历过挫折, 才能够真正明白其中的道理。
也不是说别人故意坑你。
然而, 讲的是, 就那“完全培养基”这三个字, 听着似乎十分省心, 对不对? 把包装弄开, 倒进去, 细胞便存活了, 便生长良好了, 便白白胖胖了。
呵。
我当初也是这么想的。
那结果究竟如何? 上皮细胞, 特别是原代的那一批, 娇气的程度达到什么境况? 若是用于生成它的培养基里某一种因子稍微欠缺那么一丁点儿, 又或者是某一种成分的浓度出现偏差——它不会与你产生争执辩论, 而是不假思索走向死亡展现在你眼前。呈现出那样的情形，毫无声响动静地, 就开始飘浮起来, 就变得圆润起来, 就破碎开来了。
你说你气不气。
为什么你的上皮细胞总是养不好？
这个问题我琢磨了很久。
之后我发觉, 好多人实际上压根就没弄明白一件事, 上皮细胞与成纤维细胞, 这两者所需的东西是全然不一样的。你要用那通用的一套方法去培养上皮细胞, 它自然是不会认可的。
好比你没法用喂猫的粮食去喂养狗, 尽管它们都属于宠物食用的粮食范畴, 然而猫所必需的牛磺酸，狗并不需要那么大量, 反之, 狗粮之中的某些成分对于猫来讲甚至等同于毒药。
细胞也是一样的道理。
钙离子浓度对于上皮细胞而言特别敏感, 表皮生长因子（EGF）的依赖程度上皮细胞远高于其他类型细胞。而在那些被称作“通用完全培养基”的里面, 常常都是按折中方案来配制的。
折中方案。
你可清楚什么称作折中? 那便是无论哪个细胞, 都不存在养死的情况, 然而, 也没有任何一个细胞能够被养得很好。
完全培养基到底“完全”在哪里？
我猜你查过不少资料。
你会瞧见好多厂家讲, 我们的培养基增添了各类生长因子, 增添了各类氨基酸, 增添了各类微量元素……听起来挺完备, 对不?
但问题是，全不等于对。
如同你进行烹饪时, 你将超市内全部的调料都倾倒进去, 那般情况下那锅菜肴能够具备可口的味道吗, 这明显是不可能的, 它只会演变成一锅根本无从知晓究竟是什么东西的混杂之物。
其“完全”, 所针对而言, 应是“针对上皮细胞需求的完整配方”, 并非“把所有能加的东西都加进去”。
这里我特别想提一个东西：血清。
有不少人认为, 血清是极为不错的事物呀, 其富有充足营养, 涵盖各种物质。然而血清实则是最为显著的变量。不同的批次、源自不同地方的血清, 其中所含的激素以及生长因子的含量存在极大差异。你这番使用这批血清培养而产出的细胞状态相当良好, 下一回更换了另一批血清, 就全都没用了。
所以, 真正能够依靠得住的完全培养基, 应当是含有很低血清含量甚至是没有血清的情况, 并且所有的成分, 都是属于已知的状态, 都是可控的情形, 且都是稳定的状况。
怎么挑？你得分清楚这三点
看你的细胞是什么来源。
是来自人的源头的吗? 是源于鼠类的源头的吗? 还是别的源头种类的? 不同的生物种类, 对于营养方面的需求差别是很大的。有一些人在购买培养基时仅仅只是看重品牌却不去留意适合使用的物种类型, 最终拿着适用于人的配方去培育小鼠类的细胞, 这样子效果怎么可能会好, 那才怪。
看你的实验目的。
请问你是进行常规传代维持的操作, 还是开展诱导分化的工作, 亦或是做转染呢? 由于目的存在差异, 所以对于培养基的要求也是各不相同的。举例来说, 倘若你要进行转染, 那么培养基当中就不可以含有数量过多的抗生素以及抗真菌剂, 因为这些物质会对转染效率产生影响。
看配方里有没有“智商税”成分。
有些厂家热衷于往里面添一些听上去极为高端然而实际上毫无用处的事物, 像某种价格不菲的植物提取物, 传扬称其能够推动细胞增殖, 可在文献当中压根寻觅不到确凿有力的证据, 这些统统都是成本, 最终都会转移到你身上去。
别迷信“进口”这两个字
我承认，进口的某些东西确实好。
但不是所有进口的东西都好。
有些进口的完全培养基, 其配方是针对欧美实验室常用的那几株标准细胞系进行优化的, 你把它拿回来用于培养自己分离的原代细胞, 出现水土不服的概率是相当高的。
而且价格贵啊。
有着500ml容量的、属于进口的、完全的培养基, 动不动就要上千块钱。你一个月会消耗掉几瓶这样的培养基, 如此一来, 实验经费就会被烧掉一大半。
这几年国产的进步实际上是颇为显著的。存在一些厂家, 其配方是针对国内实验室常常会使用的细胞类型进行了专门的优化处理。在价格方面, 仅仅是进口的一半, 然而效果却并不逊色。
我不是说国产的一定好，我是说你不要有刻板印象。
最好用的方法是什么？自己试
我没办法直接告诉你买哪个品牌。
鉴于你的细胞, 与我的细胞存在差异, 鉴于你的实验条件, 和我的实验条件并不相同, 鉴于你的操作习惯, 不同于我的操作习惯, 所以适合我的, 不一定就适合你。
但你可以做一件事：买小包装的试用装。
不少正规厂家都会提供试用装, 是几十毫升的那种。你把它拿回去, 跟你当下正在使用的培养基做一番对比。针对同样的细胞，处于同样的培养条件下, 一边使用你原来的培养基, 一边使用试用装, 培养个两三天, 观察细胞形态, 考察增殖速度, 查看存活率。
数据不会骗你。
你觉得哪种效果好，就选哪种。
这个方法笨是笨了点，但最可靠。
最后说几句掏心窝的话
做细胞培养这件事吧，真的急不得。
时不时地, 你更换了好些种类的培养基之时, 细胞却依旧呈现出半死不活的状态。对于 this 情况, 需注意, 别匆忙去怪罪培养基, 因为有可能是你所用培养箱内的 CO₂浓度这一方面出现了偏差, 也又或许是你所使用的胰酶其消化时长过长导致的, 除此之外, 还兴许是你用于操作的台子里头存在着污染状况。
细胞培养是一整个系统，培养基只是其中一环。
但培养基确实是最重要的一环。
麻烦你花些时间去将它慎重挑选妥当了, 后续开展的实验便会顺遂得多。经由如此节省下来的时间跟精力, 相较那少量培养基所花费的金钱而言, 可是无比值钱许多的。
别问我怎么知道的。
都是拿细胞死出来的经验。
