搞病理的同行可能都有这种体验——
一堆抗体摆在那,不知道该先染哪个。
实事求是讲, 我处于刚开始进入这个行业的那段时期也是如此, 看到任何一个都感觉应当去做, 然而最终一张片子所获得的报酬只有几百块, 耗费了大量精力却得不到好的回报。
后来老师傅一句话点醒了我:“你不是在染色,你是在找方向。”
方向错了,抗体再多也没用。
怎么判断这个抗体是不是“对的”?
很多人以为贵的就好,大牌的就靠谱。其实不一定。
你要先问自己三个问题:
你所提及的这块组织其来源究竟是什么, 是通过穿刺获取的, 还是经过切除得到的, 亦或是采用冷冻方式得来的? 不同的标本对于抗体的容忍程度是全然不一样的。穿刺所得到的那少量东西 , 根本不可能去做二十种 , 必须要精心挑选。
你锁定诊断方向了吗, 是鉴别癌呢还是肉瘤, 是上皮来源呀还是淋巴来源, 这个要是搞不明白, 那后面全都是瞎忙活。
你的实验室条件能不能给予支持呢, 存在这样的情况, 有些抗体是需要进行特殊修复的, 并且需要特殊通风条件, 甚至还得使用专用一抗稀释液才行。而你的实验室并不具备那样的条件, 就算买了也只是白费力气罢了。
这三个问题想清楚了,抗体选择就简单一半。
为什么同一批抗体有时候染出来忽好忽坏?
这可能是最让人头疼的事了。
上周还染得漂漂亮亮的,这周就一片背景,啥也看不清。
别忙着责怪抗体。你先去查验一下修复液, 看是不是浓度配错了? 接着再去核查一番孵育时间, 瞧瞧是不是有人改动了程序? 最后好好看看组织自身, 是不是固定时间处于过长或者过短的情况?
我们实验室曾发生过一回极其离谱的事儿, 那便是更换了批号的PBS, 随后背景直接就产生了爆炸的情况。之后又替换回来, 情况就恢复正常了。
有时这问题, 压根儿不在抗体那儿, 而是在那些, 你觉得向来都不会出状况的“小东西”身上。
什么情况下该加做抗体?什么情况下适可而止?
很多人都被“多多益善”给忽悠了。
其实真正的高手,是知道什么时候停下来。
假设你已然拥有了清晰明确的诊断依据, 其涵盖形态、H&E以及三四个关键抗体, 结果已然十分稳固, 已然如此, 那就不要再增添了。增添过多反而极易出现矛盾状况, 给自己制造麻烦。
但有一种情况必须加——你的结果和临床对不上。
比如, 病人明显呈现出类似肺癌的症状, 可是你的抗体却完全没有一个能提供支持, 这种情况下, 那就必须扩大范围, 去思考是不是源于其他来源的转移。在这个时候, 千万别节省, 多做一个组套比起靠猜测来猜测去要强大一百倍。
怎么保存抗体才能用得久?
这个问题问的人最多。
我的建议就三个字:分、冻、记。
货一到, 立刻进行分装, 将大包装分成小管子装, 每一小管仅使用一回, 以此预防反复冻融。
冻, 多数抗体放置于零下二十摄氏度, 个别少数能够放置于四摄氏度, 然而务必得仔细看清说明书, 切勿混淆放置。
记着, 每一支管子之上, 要清清楚楚地写上自己的名字, 还有相对应的浓度, 以及分装的具体日期。不要以为自己能够记住, 三个月之后, 你绝对会忘掉的。
抗体价格差异大,是不是越贵越好?
不完全是。
或许价值高的存在着品质稳固、批次间差异微小、具备较高技术含量的特点, 而价值低的同样有可能全然满足使用需求。
关键看你做什么。
在日常诊断情形下挑选时, 应选用性价比高的那种。而要是处于科研论文或者疑难病例的状况时, 就不要在费用上过于计较节省, 要将品质保持稳定置于首要位置上。
我个人的习惯是:核心抗体用好牌子的,辅助抗体可以灵活一点。
到底该备多少种抗体才算够?
这个问题没有标准答案。
但有一个原则——别贪。
你并非大型病理中心, 无需备上一二百种。备二三十种常用且针对性强的, 便足以应对绝大多数情形了。
关键是你会不会用,而不是你囤了多少。
我曾目睹带教老师凭借十几种抗体, 将任何疑难病例都成功攻克。同时也曾见识到实验室放置着一百多种抗体, 然而用到实际中却一塌糊涂。
抗体这东西,不在多,在精。
最后说点实在的
选抗体就像选工具。
你得知道你要干什么活,才知道该拿什么工具。
莫要遭各式宣传话语给误导偏离了方向, 亦不要被价格给吓得止住了脚步。实验进行得多了, 自然而然就会晓得哪几个抗体具备挽救性命的功效, 哪几个是用来充数的。
希望每个做病理的朋友,都能少走弯路。
毕竟咱们的目标从来不是把抗体染好看,而是把诊断做准确。
那才是真正值钱的事。