毫不隐瞒而言, 当本人头一回碰到“通用型PCR试剂盒”这几个字眼之际, 于脑海中率先浮现而出的首个画面, 并非是在实验室里摆放着的那些静静无声的仪器以及被冻住的管子, 反而是……一个具备万能特性的工具箱。
没错, 正是那类你始终没法晓得何时会用得上, 然而一旦需要用到, 就生起一股想要狠狠拍在桌子上的那种物件。
或者你也会有这般感受, 在投身实验进程之中, 于半途之时, 骤然发觉模板的GC含量高得出奇离谱, 又或者那次要是遇到那个意外状况, 扩增产物老是无端出现那种让人摸不着头脑的非特异性条带, 你定睛凝视着那管反应液, 脑海中思忖着: 要不要更换试剂盒呢? 然而却又心存顾虑, 只怕一旦更换, 结果仍就落入另一个陷阱之中。
所以才说，通用型PCR试剂盒，听着挺美，用着却未必。
什么是通用型PCR试剂盒
它不是万能的。
你去查看那些产品说明书, 几乎每一家都这么书写: 适用于多种模板, 适用于多种引物。然而, 你若真正拿一个复杂样本进行尝试, 一半的试剂盒就会暴露其不足之处了。
通用意味着对于大多数常见的实验条件, 它具备较好的兼容性, 比如当你从基因组DNA、cDNA, 或是一些粗提样本中进行扩增时, 它能够给予你一个相对稳定的结果。
但“相对”这个词，你得划重点。
要讲PCR扩增这个事物, 往根儿上说它实实在在就是一场在分子这个层面上展开的无比精密的博弈, 酶, 缓冲液, 镁离子的浓度, 退火的温度, 每一个参数出现的细微游动变化, 都能够使得“通用”这两个字变得好似马上就要坠落下来一般。
那么你问, 我通用型PCR试剂盒可不可以? 本人将讲, 行, 可是前提条件须是你要明白它好之处以及不足处何方。
为什么很多人买通用型PCR试剂盒
省钱省事呗。
特别是那些才开始起步的实验室, 又或者是检测量不多的小机构, 准备上几种专用的试剂盒, 成本高得能让人觉得肉疼。在这个时候, 一款能够跑通大多数模板的通用型PCR试剂盒, 简直就如同救星一般。
你没必要针对一个特别样本进行单独采购, 无需耗费时间去优化体系, 就连退火温度的事儿都不用去操心。
存在着一些厂家，他们的做法显得相当精巧灵敏, 径直于配方之中添入了增强剂以及稳定剂, 致使那些拥有高GC、重复序列, 甚至还包含部分抑制剂的样本, 皆能够顺畅地被扩增出来。接着对此, 你仅需添加模板、加入水, 而后放置于仪器上进行运作便可。
这种体验，说实话，挺上头的。
通用型PCR试剂盒的隐形天花板
你瞧, 那些于PCR领域历经多年摸爬滚打历练的娴熟之人, 常常手中备着两三种试剂盒，其中一种专门用于跑高GC的情况, 一种专门用于跑长片段的状况, 另外一种则是那种宣称“什么都能够跑”的通用类型。
为什么？
因为通用就意味着妥协。
它得兼顾超多条件, 肯定没法在某特定场景里做到极致, 像是有些高GC的模板, 专用试剂盒加的是专门优化过的解链酶以及溶剂, 跑出来的条带又亮又特异, 你用通用型去跑, 或许也能出带, 可亮度差了一半, 背景还脏污。
这不是说通用型不好，而是你得清楚它的边界在哪。
我始终都这么认为, 一款称得上好的通用型PCR试剂盒, 并非是那种会让你不加思索地什么情况都用它, 而是要让你在绝大多数情形之下, 先去用它尝试一下, 一旦不行, 然后再去更换专用的类型。
它应该是你实验流程里的第一块试金石。
那什么样的通用型PCR试剂盒算好的
我说几个自己摸爬滚打得出来的经验吧，不一定对，但确实有用。
瞧它的抗抑制方面的能力, 你将它用于运行一个添加了少量血液或者组织裂解液的样本, 要是依旧能够稳定地出现条带, 那就表明这个试剂盒的缓冲液配方确属有其独特之处。
把它的热启动酶的活性稳定性予以查看, 将其放置在4度的环境中一星期之久, 当其被拿出来进行一次操作后, 把所得结果与新的相比较, 倘若条带的差异并不大, 那么这便是值得留存下来的。
观测其是否为真正实质意义上的“免优化”情形, 存在部分试剂盒宣称具备免优化特性, 然而实际上却需自身去调制镁离子浓度, 如此便略显窘迫了。
有一点我想要特别地去说一下, 别只是单一去看广告, 得去看数据。正规的厂家都会在其官网上放置技术支撑方面的数据, 像各种模板的扩增结果图, 不同退火温度之下的表现。这些东西比销售所描述得天花乱坠要靠谱许多。
通用型PCR试剂盒的下一步
在我的认知里, 对于未来的那种通用型的PCR试剂盒而言, 其必然会朝着“智能兼容”这样的一个方向去发展。
啥是智能兼容, 那便是试剂盒自身不再单单是被动地去适应模板, 反倒是借助配方创新, 主动地去辨认以及匹配不一样类型的模板特征。比如说有的模板要求更高的镁离子, 而言试剂盒里的缓冲液会经由某种“动力学缓冲”来予以补偿。
听起来有点玄，但技术路线其实已经有公司在探索了。
另外, 我还留意到一些厂商已然着手于在通用型试剂盒当中引入“防错”机制, 比方说对于引物二聚体的抑制, 以及针对非特异性结合实施的竞争性阻断, 而这些原本属于专门领域的试剂盒才具备的功能, 正逐渐地被下放到通用型这边来了。
这或许才是真正的通用型的进化方向, 并非是什么都可以, 相反是在绝大多数情形之下, 都是可行的。
最后还是想说一句
你如果问我，实验室里该不该常备通用型PCR试剂盒？
我会说，备着。
但别把它当成唯一的武器。
真正算得上实验高手的人, 压根不会仅仅凭借一个试剂盒去闯荡整个领域, 而是对自己手头握着的每一款工具都无比明晰, 知晓其所具备的独特脾性, 清楚其所能达到的最高限度, 明白其那细微的、并非适用于所有情况的特殊性。
就像你不会用一把瑞士军刀去拆发动机，也不会用扳手去开红酒。
通用，是一种智慧。但懂得什么时候不通用，是另一种。
