讲起来也许你难以相信, 我刚开始进入行业的时候, 第一个被老板斥责的缘由, 就在于这个盒子之上。
彼时刚开始接手一项关于猴子的免疫项目, 想着省些事儿, 随意选了个价格低廉的ELISA试剂盒。结果如何呢? 标准曲线绘制出来后如同心电图一般, 样本的OD值杂乱跳动, 进行了三次重复操作, 数据却仍旧相互冲突。老板看了一下, 未发一言, 只是轻轻叹了一口气。那声叹气比遭受责骂还要令人难受。
过后跟着先辈一步步磕磕绊绊地摸索前行, 才领悟出一个道理: 猴ELISA试剂盒这个物件, 真并非价格越昂贵就越好, 又并非价格越低廉就越好。其注重的是适配。
怎么才算“匹配”你的样本？
你可能要问了，我手头这批猴子血清，到底能不能用这个盒？
换句话讲, 猴子的免疫系统与人的相似度颇高, 然而终究是猴。存在一些盒是针对食蟹猴研发的, 部分盒是针对恒河猴的。倘若你用食蟹猴的盒去处理恒河猴的样本, 并非全然不可行, 不过结果或许便是“差不多”, 而科研中最怕出现的正是“差不多”。差那么一点儿, 结论就崩塌了。
我存在一位友人, 其涉及神经退行性疾病领域, 那时为了检测猴子脑脊液之中的某一个因子, 尝试了三个品牌, 最终发觉, 针对同一标本, A盒检测的具体表现为阳性, 而B盒检测的具体表现则为阴性。请问你说他应该相信哪一方呢? 随后他将该样本送去进行质谱分析, 方才知晓A盒的抗体交叉反应极为显著, 对于猴源的蛋白质识别并不具备特异性。
故而, 切莫仅瞧书写着“猴”字的使用说明, 你需要仔细查看清楚, 究竟是哪一种猴类品种, 样本的类型到底为血清、血浆还是组织匀浆。这一环节是绝不能省略的。
别被“高灵敏度”忽悠了
当下市面上所售的猴ELISA试剂盒, 每一个都宣称自己具备高灵敏度, 其检测下限直至低至多少多少pg/mL哟。
听着很厉害对吧？
但是你需要去思考一个问题, 在你的样本当中, 这个指标的正常浓度范围究竟是多少呢? 要是正常浓度自身就处于很高的状态, 就好比说达到了几百ng/mL的程度, 那么你去购买一个检测下限为1pg/mL的盒子, 这有意义吗? 是有意义的, 不过不是很大, 相反地, 很有可能由于过度灵敏, 从而将背景噪音也进行了放大, 最终导致数据毛刺特别多。
我曾经历过这般吃亏的事儿。去到去年的时候, 去做那个测试小猴炎症因子IL - 6, 买了一款具备超级灵敏特性的盒了。可结果, 对照组空白孔滴OD值居然都飙升到0.3这个数值, 样本孔那里根本就没办法拉开其中的差距哩。之后, 又去换了另外一款有着灵敏度适中并且特异性更佳优点的盒, 数据一下子就变得干净利落了。
怎么选不被坑？
讲真的, 当下制作猴ELISA试剂盒的厂商数量实在是太多了, 可以说是好坏混杂。存在一些品牌, 就连自身所拥有的抗体都是委托外部进行加工的, 其纯化的工艺简直糟糕透顶。
我的经验是三步走。
首先, 查看参考文献, 不要轻信宣传册内容, 前往PubMed进行搜索, 查看是否有同行使用这个品牌的盒发表过文章, 若存在此类情况, 表明至少人家进行过验证。
第二步, 查看批间差, 此问题极为隐蔽, 不同批次的盒, 存在有时差别很大之势, 你于第一周所做之实验与第二周所做之实验, 若批间差十分巨大, 数据决然无法进行合并, 正规的厂家会将批间差CV值予以标明, 通常小于10%方算可靠。
迈向第三步时, 要着手去做预实验, 可别不舍得用样本, 先选取个两三份已然知晓为阳性的猴血清去跑上一回，以此查看重复性怎样, 要是重复孔彼此之间的变异系数超出了15%, 那就得趁早换了。
说实话，有时候就是个“试错”的过程
你可能觉得我啰嗦了。
然而从事实验的那些人都清楚, 最为惧怕的并非是结果欠佳, 而是结果并非真实。像猴ELISA试剂盒这类物品，它仅仅是一种工具。工具是否好用, 只有实际操作后才能够知晓。不要寄希望于一个盒子能够解决全部问题, 也不要由于一次失败就去否定整个的技术路线。
至如今, 于吾抽屉之中, 仍置有三款不同品牌之猴IL - 10试剂盒。每逢开展全新课题, 吾皆会再次进行评估, 考量的是何种试剂盒对于这批样本最为适宜妥当。此举是否麻烦? 是颇为麻烦的。然而, 这总归要相较让数据遭受审稿人质疑要好上许多。
最后说一句题外话
进行猴实验, 成本高昂, 样本极为珍贵。每一个样本的背后, 都存在着时间以及经费的投入。挑选合适的盒, 不仅仅是能够节省钱财, 更重要的是对那些样本怀有对得起的心。
好了，就说这么多。希望对你有帮助。
