你还在用冻存细胞做实验？
讲真的, 好多从事科研工作的朋友, 当最初着手接触细胞实验时, 皆是先从培养细胞系开始起步的。在那个阶段, 内心觉着, 嗨, 这东西貌似挺容易的, 进行传代操作、实施冻存处理、开展复苏工作, 历经一整套流程做完后, 所得到的数据十分美观漂亮。
然而，当你切实开启去触碰小鼠原代细胞这份行动的时候, 你便会发觉, 此物全然并非是同一回事的那种状况啦。
细胞系乃是经历“驯化”的, 其已然适配了体外环境, 无论怎样折腾均可存活。那原代细胞又如何呢? 它刚从活体之中脱离出来, 性格敏感且脾气较大, 稍有不如意便会死去给人看。
为什么你的原代细胞总是养不活？
这个问题, 我听闻好多回了。每回有人前来询问, 我都会反过来问他: 你所使用的是什么培养基? 血清所占的比例是多少? 有没有添加因子?
结果十有八九，他们用的还是养细胞系的那一套。
小鼠原代细胞, 对环境的要求, 相较于娇贵的兰花, 还要更为苛刻。温度出现波动, 哪怕仅仅零点几度, 它都极有可能凋亡。培养基的营养, 倘若不够全面, 它便会逐渐停止生长, 最终成为一堆悬浮着的死细胞。
还有提取这一环节, 极为关键。好多人贪图便捷, 对消化时间随意猜测假定, 结果要不就是消化程度不足, 细胞相互粘连难以撕开；要不就是消化过度, 细胞膜已然破裂, 那还怎么继续培养呢?
小标题：怎么才算“成功提取”了原代细胞？
你可能以为，只要从组织里捣鼓出一些细胞，就算提取成功了。
错。
真正达成成功提取的情况是, 你能够在显微镜之下看到, 那些细胞呈现出形态一致状, 且折光性良好, 并且在铺开以后具备正常的生长趋势, 而非一堆杂乱无章的碎片, 也并非一群皱缩成小圆点状的“死球”。
用以判定的准则极为简易: 于提取完毕之后的24小时范围之内, 要是你能够目睹那些贴附于壁上的细胞开始进行伸展、发生变形、展开分裂, 如此这般这一阶段方可算作通过了。倘若在历经24小时之后呈现的依旧是一连串的圆点, 基本上就宣告失败了。
培养小鼠原代细胞，得哄着来
养细胞系的时候，你可能隔两天才换个液，觉得没啥问题。
不可进行养小鼠原代细胞的操作。它们的新陈代谢实际上相较于细胞系更为复杂, 排出的废物量更多, 而且对于ph值方面的变化呈现出极度敏感的状态。
基本上我是这么提议的, 头三天每一天都要更换一回液体, 后续依据细胞密度来定, 能够略微把时间进行延长, 然而绝对不可以超出两天。
还有, 观察的频率得往上提一提。每天最少得看两次显微镜, 上午看一回, 下午再看一回。这可不是为了看着好看, 而是为了能及时把问题给发现到。比方说有没有那种奇特的颗粒冒出来, 背景当中有没有飘起来的“废弃物, 细胞之间的间隙是不是一下子就变大了——这些可都是“求救的信号”。
别光盯着细胞，看看你的耗材
很多人忽略了一个细节。
培养皿, 离心管, 枪头, 这些物品的质量, 直接对小鼠原代细胞的存活率起着决定作用。千万别因为贪图便宜而去购买那种制作粗糙劣质的塑料耗材, 有些材质自身就带有一定毒性, 或者并非特别适合细胞进行贴壁。
我曾经存在一位朋友, 无论如何都没法将原代肝细胞养好, 哪怕去更换了各式各样的培养基, 全部都没有成效。而后我促使他去换一种品牌的培养板, 问题便极为顺利地得到了解决。
此种事情听起来颇具玄学意味, 实际上其道理是十分简单的, 细胞相较于人而言更为敏感, 它能够感知得到那些细微的差异。
做实验这件事，耐心比天赋重要
说了这么多，其实只想表达一个意思。
不是洪水猛兽的小鼠原代细胞, 它只是需要你再多付出那么一点耐心, 你愿意针对它多花时间去琢磨提取条件, 愿意为了它每天多跑几趟细胞房, 愿意因它去调整那些“差不多”的实验习惯, 它就愿意给你长出漂亮的数据。
别怕失败，谁的原代细胞不是从一堆碎片里长出来的？
只是, 下一回, 当你对着那一簇细胞茫然无措之际, 要记着回身瞧瞧: 是否一开始的提取, 已然偏离了正轨。
把基础做扎实了，后面的事，水到渠成。
