说实话, 在我才开展实验那段时候, 也曾经臆认为, 培养基不过就是给细胞提供吃的物品而已, 是吗。
随便加点血清、倒点基础液，细胞爱长不长。
那结果究竟会怎样呢? 隔三岔五细胞就飘起来了, 贴壁时根本贴不住, 其生长态势宛如老太太行走那般——慢得简直能把人急哭。
随后带着我的那位师兄实在看不下去了, 扔给我这样一句话, 你连细胞吃的是什么都弄不明白, 那它凭什么会给你好好地生长呢?
那句话，我记到现在。
到底什么是“完全培养基”？
别因这个名字而被吓住, 讲通俗的表达就是, 细胞于体外得以存活下去的全部营养, 被集中收纳在一起。
仅提供最基础的盐、糖以及氨基酸的基础培养基, 例如 DMEM、RPMI - 1640, 就如同白米饭一般。
血清，尤其是胎牛血清，相当于红烧肉、排骨汤、各种维生素片。
再加点双抗、谷氨酰胺，那就是饭后甜点和小药丸。
这三样组合在一起，才叫“完全培养基”。
缺一个，细胞就像你让我天天吃白饭——能活，但绝对活不好。
为什么有些人配的培养基细胞就是长得快？
这个问题我问过自己无数遍。
而后发觉, 机密丝毫不在配方列表之上, 却是在细微之处里。
比如血清，你解冻的时候是不是直接扔37℃水浴不管了？
我曾有此经历, 随后可见血清之中纤维蛋白呈现出大量析出的状况, 而细胞一旦进入那般环境, 便可直接产生应激反应。
又如谷氨酰胺, 这个东西在液体当中放置着放置着竟就降解了, 细胞没办法吃到它, 细胞长得能够良好那可真是怪事一桩。
真正的诀窍是：现配现用，或者分装冷冻，用一次拿一次。
还有pH值，很多人的培养基拿出来颜色偏紫，那是不对头的。
细胞对弱碱环境存有喜好, 然而要是碱度过高, 那么其情形就如同人处于高原之上, 会出现呼吸不畅的状况。
别迷信“万能配方”
有个师妹向我发问: 师姐, 网络上提及的那个XX品牌的完全培养基, 它究竟是不是最为出众的呢?
我说你实验的是什么细胞？
她说：293T。
但要是你所饲养的是原代神经元, 是肝细胞, 又或者说具有一些挑食习性情况的肿瘤株, 那么通用型的完全培养基极有可能会出现失败的状况。
为什么？
因为不同细胞的营养需求真的不一样。
比如说, 神经元对于葡萄糖以及B族维生素的需求格外高, 另外, 肝细胞为了进行解毒代谢, 需要更多的氨基酸作为支撑。
你用养293T的配方去养老鼠皮层神经元，结果只能是——细胞饿死给你看。
这不是危言耸听，我见过太多人图省事，结果白费一个月时间。
自己配还是买现成的？
这个问题没有标准答案，但我可以说说我的感受。
假如你所在实验室的细胞种类很单一, 且用量颇为大, 并且你具备相关经验, 那么自行配制完全不存在问题, 其成本低廉, 还具备灵活性。
假如你才刚开始着手养一个全新的细胞, 或者只是偶尔才进行一次细胞培养, 那么实际上真的是建议去购买现成的、经过验证的、实实在在的完全培养基。
别心疼那点钱。
一次实验失败，浪费的培养基、血清、耗材、时间，加起来远比你省下的那几十块钱多得多。
我之后养了一种相对较难处理的肿瘤干细胞, 尝试了三个品牌的完全培养基, 才寻觅到一个能让它们安稳地进行增殖的。
你说这是玄学吗？
不是。是细胞的“脾气”你得摸透。
最容易翻车的几个坑
我踩过的坑，你千万别再踩：
其首要的一点是, 血清批次呈现不稳定态势, 针对同一品牌、同一货号而言, 不同批次的血清, 细胞所产生的反应极有可能全然不同, 故而在购置时应尽可能多批量囤存同一批次的血清, 或者先行开展小批量的试验测试。
其一, 培养基放置时长过久, 其二, 配好的完全培养基长时间在4℃环境摆放, 其三, 超过两周时间后, 谷氨酰胺基本消失殆尽，其四, 部分维生素也已被氧化, 其五, 不要节省, 应当尽快使用。
首先是第三个, 然后呢, 是忘了添加双抗。特别是在培养原代细胞的时候, 由于其污染风险较高, 所以要是不添加双抗, 那就如同处于裸奔状态一样。
第四点, 不做支原体检测。细胞出现了支原体污染, 虽是尚在继续生长, 然而所获数据却皆差错百出, 等到你在发表文章之际, 审稿人会径直要求你补充实验。
怎么判断你的培养基好不好？
很简单，看细胞状态。
24小时之内贴壁行不行, 48小时倍增时间准不准, 细胞形态是不是典型那般的?
要是细胞呈现出皱巴巴的模样, 并且圆滚滚地不伸展, 又或者老是有漂浮着的死细胞碎片, 那么问题大概有八成是出在了培养基上面。
先别急于疑惑自身的操作行为, 咱得先去排查一下培养基是不是已经超过可以使用的期限, 血清是不是遭到了污染的状况, pH值是不是出现偏移的情况。
有时候换个新鲜配制的完全培养基，所有问题迎刃而解。
最后说句真心话
养细胞这件事，真的没有捷径。
完全培养基听起来是小事，但它决定了你实验的成败。
曾经, 有一位从事药物筛选工作的师兄, 耗费了半年的时间去做相关工作, 然而, 做出来的数据全部都是错误的, 最终, 经过查找发现, 原来是培养基里面某一种微量元素的浓度出现了问题, 进而导致细胞一直处于慢性应激状态！
半年啊。
所以, 千万别嫌弃我说话不够简洁明了, 唠唠叨叨的, 关于培养基这等事情, 它是非常值得你再多投入一些心思去对待的。
细胞不会说话，但它会用死活告诉你，它到底满意不满意。
