当我坦白时, 在最初听闻“HASMC”这个名词之际, 我的脑海当中所浮现出来的是一一大堆我根本看不懂的英文, 以及实验室里呈现出生冷冰冷状态的培养皿。
有一回, 一个从事血管研究工作的朋友, 在半夜的时候, 像发了疯似的给我发送语音, 讲他所研究的内皮细胞生长态势非常良好, 然而平滑肌细胞却怎么养都养不活。他述说着, 要是缺少了这个细胞, 那他整个的课题就会成为一个被人耻笑的事情。
在那一个时刻, 我忽然之间就懂了, 此般事物, 并非是一个学术方面的名词, 而是众多从事科研工作之人内心的一块心病。
什么是人主动脉平滑肌细胞？为什么这东西这么难搞？
简单来讲, 是你家水管当中那一层管壁处的肌肉细胞。血管并非一根空的管子, 它具备三层结构, 最中央的那一层, 乃是平滑肌细胞的所在区域。
它是血管弹性得以形成的源头所在, 是参与血压调节工作的微小力量, 还是动脉粥样硬化、高血压这类病症发生时的关键场所。倘若你打算探究血管变得僵硬的具体过程、出现堵塞的具体情形以及逐渐老化的具体状况, 那么它绝对是无法避开的重要因素。
但问题来了——这东西非常娇气。
别的细胞, 冻一冻、泡一泡, 还能生机盎然活力满满。HASMC可不一样, 它脾气倔强, 对培养条件的敏感程度等同于猫对陌生人靠近时那样。只要你稍微手抖那么一下, 培养基温度出现偏差, 它就会消极怠工, 生长得歪七扭八, 甚而直接走向死亡。
为什么养它老出问题？你可能犯了这几个错
我见过太多人，兴冲冲买了细胞，结果一周后就开始骂娘。
最为常见的那个问题, 首要情况是复苏之际速度过快。自液氮之中取出后, 急切到恨不得一秒就完全化开, 最终致使细胞尚未适应环境便被相当于烫死那般的状态了。正确的操作方式是, 将其置于37度的水浴环境里, 进行快速摇晃动作, 然而时间不能超过一分钟。
其次是培养基的挑选方面, 众多新手觉得随意买个DMEM便行。然而, HASMC对营养成分需求颇高, 倘若缺失特定的生长因子, 它就如同你饿着肚子去加班, 能够支撑但绝对不会生长。
第三点是传代的时机, 不少人在细胞长满之后才记起要传代, 结果细胞已然老化、分化了, 即便再去传代也无法回到起初的状态, 最佳的时机乃是细胞长到大概80%, 尚未完全铺满的时候。
还有句话听起来不太顺耳, 部分人的状况根本不是操作方面的问题, 而是细胞自身存在问题。所购买的细胞传代次数过多, 或者来源的质量欠佳, 无论你怎样去精心照料都没有作用。
怎么选到靠谱的细胞？别只看价格
于网上去搜索一番, 售卖HASMC的供应商存在好多好多, 其价格处在从几百至几千的不同范围而不相一致。然而, 那些价格较为便宜的物品, 在后续往往是紧跟着更为巨大的陷阱。
重点在于查看几个方面: 供体的相关信息, 代次情况, 检测报告。一款靠谱的细胞产品, 会向你说明这个细胞是从什么样的人的主动脉获取的, 年龄是多少, 有没有病史, 传到了第几代。要是连这些信息都表述得模棱两可, 那你就是在进行一场冒险的赌博行为了。
另外, 去查看它的纯度, 众多被称作平滑肌细胞的物质里, 存在着混杂的成纤维细胞, 你选取这样的细胞来进行实验, 所得到的数据根本无法做出解释。
我经历过自己踩坑的情况, 就是购买了一家小公司所谓的便宜货, 宣称是P3代, 然而当拿到手去查看时, 发现其形态已然发生了变化, 完全不是正常应有的梭形模样, 最终导致那一批的数据全部报废不能用了。
养它到底图什么？那些耗在上面的日子值得吗
诚实地讲, 养殖HASMC着实是颇为痛苦的。其成长周期相较于一般细胞要慢上一些, 增殖速率大约是两至三天传代一次。每当进行换液操作之际, 你都必须万分谨慎, 唯恐某次吹力过大而将其吹离。
但是, 当你目睹它于显微镜之下展现出那般典型的“峰谷样”生长态势, 也就是一条条细细长长的梭形细胞, 朝着同一个方向依次排列, 好似队列那般井然有序, 此时所产生的那种成就感, 着实会让人感觉颇为兴奋且难以抑制。
而且，这东西真的能帮你回答很多问题。
比如说, 你朝着培养基当中添加些许氧化低密度脂蛋白, 用以模拟高血脂的那种环境, 在此种情况下, 你就会发觉它开始去摄取脂质, 进而渐渐转变为泡沫细胞, 而这便是动脉粥样硬化的早期步骤了。
又比如说, 你运用转化生长因子对它予以刺激, 它会由收縮表型转变为合成表型, 好像好人被逼迫成了坏人, 进而启始疯狂地分泌胶原, 这便是血管纤维化的进程。
这么讲吧, 饲养它并非单纯出于养护的目的去饲养, 而是为了能够明白那些于你身体内部静悄悄地出现的病变。
绕不开的那些“坑”和“法宝”
有几个细节，是别人不会告诉你的。
血清质量对HASMC而言极为敏感, 养殖别的细胞时普通胎牛血清勉强还行, 然而养殖它的话, 以专门优化的平滑肌细胞生长培养基作为最佳选择才合适, 倘若贪图省钱就会面临后果, 后果是细胞不会生长。
它对频繁进行换液这种行为并不喜欢, 尽管有好多人认为勤换液是件有益之事, 然而对于这个细胞来讲, 每一回换液皆属于一种扰动, 它偏好稳定, 仿若有些人惟有在静谧的环境里才能够思索那般。
用于机体的是多些百分之血清, 平常的则加些百分之DMSO, 将其配制成贮存用的液体, 这是人们常用的方式呢。然而对于特定细胞, 此配方的耐受程度一般。所以更适宜的办法是, 选用专用冻存液, 或者降低DMSO含量的同时, 搭配一些抗冻蛋白。
有个友人饲养了三个月始终处于失败状态, 终于在最后找出是冻存液体引发的问题, 更换了配方以后, 细胞进行复苏便存活了, 你瞧, 诸多失败并非是你能力不足, 而是工具存在偏差。
最后说点真实的
不少人撰写这类事物, 最终都会给你呈上一段诸如“期望你那实验顺遂”这般充满温情的话语。
但我觉得，真正做科研的人，不需要这些虚的。
你所需要的是, 弄明白你究竟想要什么样的答案, 接着, 挑选正确的工具, 运用恰当的方法, 并且耐住性子。
培育HASMC这个事情, 讲起来繁杂也还算繁杂, 谈起来简便也较为简便。它绝对不会出于你着急便去迎合你, 表示不会由于你斥责它一下就有所改善。它始终在那里, 等待着你经由正确的方式去靠近它。
一旦你才着手开始养它, 别畏惧失败。我首次养时弄死过它, 第二次养也致使它死掉了, 第三次之际才略微弄明白一丝其中的窍门。
之后我发觉, 全部的耐心, 最终都会转变为那些好看的曲线以及图谱, 转变为你论文里最具说服力的数据。
就这样。
