说实话，我刚接触流式抗体那会儿，脑子是懵的。
满眼都是那CD3、CD4、CD8, 还有好些PE、FITC、APC, 瞅得人脑袋直发晕。更让人崩溃不已的是, 动用几千块钱买来的抗体, 上机运行完毕之后却发现——竟然没信号显示出来。
那种感觉，就像你精心准备了一桌菜，结果客人说没放盐。
之后, 和实验室里的老前辈谈话, 他讲了一句直至如今我都记着的话语: “流式抗体此物, 并非价格越昂贵便越好, 也并非品牌越具影响力就越稳定, 关键之处在于——你必须清楚自己究竟要检测什么。”。
流式抗体，到底是个啥
简单来讲, 它是一个有着荧光标签的探针, 你用它去抓取细胞表面的蛋白, 抓到后, 机器可凭借荧光信号识别出来, 听起来很厉害, 实际上类似钓鱼, 抗体是鱼钩, 荧光是浮漂。
然而问题的关键所在便是, 在销售鱼钩的市场范围中存在着过多的商户, 并且每一个商户都宣称自身所售的钩子是最为锐利的。
选克隆号，比选品牌重要一百倍
好多人一开始就把目光聚焦在品牌上, 比如: BD, BioLegend, eBioscience等等之类的, 拜托, 这些具有高知名度的品牌固然是很不错的, 但你是否清楚知晓, 对于同一个品牌, 且是同一个靶标而言, 有可能会存在十几个不一样的克隆号?
比如说, 你要是打算去测CD4, 在市面上存在着OKT4、SK3、RPA-T4这三个较为常见的克隆。要是你所使用的是RPA-T4, 然而在人家所制定的实验方案里面写的却是OKT4, 那么最终的结果极有可能就会出现偏差。
这不是玄学，是科学。
我遭遇过极为巨大的被坑状况, 那便是, 贪图价格低廉去购置了一款并非知名品牌克隆编号的抗体, 然而, 最终跑出来的双峰呈现出怪异奇特的样子, 其重复性之差, 简直差到了让我萌生想摔机器的念头。
荧光通道搭配，不是你想的那么简单
“我买最亮的荧光不就行了？”
天真。
就像处在一个配置了多车道的高速公路那般的流式细胞仪情况, 存在着每个荧光都拥有自有专属车道的状况。要是你把两个极其明亮刺眼的荧光放置到同一个车道呢——举例来讲类似于PE以及PE - Cy7这种情况, 它们的发射光谱会出现重叠迹象, 恰似两辆车拥挤在一条道路上, 最终谁都无法通行过去。
实际上正确的行径是, 那种稀有的抗原采用亮荧光来进行处理, 而表达量高的抗原呢, 则运用弱荧光来予以处置。就好比像是CD45这种分布极为广泛到处都存在的, 使用FITC就可以了, 千万不要动用PE-Cy7白白去耗费资源。
这个道理，我当时花了三个月才搞明白。
保存和运输，比想象中更娇气
你可能觉得：抗体嘛，放在冰箱不就行了？
错。
使用流式抗体时, 最怕的事情有两件, 一件是反复冻熔, 另一件是光照, 每当取出来使用一次, 都务必放置在冰上, 使用完毕后需马上放回去, 有些抗体格外娇贵, 在运输过程里, 一旦所处温度升高, 荧光就会熄灭。
有一回, 我购置了满满一箱子的抗体, 当通过物流寄过来之时, 冷藏用的冰袋已然融化掉了, 打开箱子瞧, 它们就如同被温水浸泡过一般。而后进行上机运行, 信号微弱得简直让人怀疑自己的人生。从那之后, 我再也不敢节省那一点儿运费了, 毅然决然地选择发顺丰冷链。
别迷信“同型对照”
这个真的是新手重灾区。
同型对照是被用于将非特异性结合给排除掉的, 然而要是你把同型给选错了, 又或者浓度没有调整好的话, 它反倒会为你制造出假阴性来。众多公司所给出的同型对照, 跟你的目标抗体根本就不是来自同一个克隆源头, 那还能对比些什么呢?
我现在的习惯是：用Fc受体阻断剂代替同型对照，省事还靠谱。
小样本实验，别买大包装
这个也是血泪教训。
平常状况之下, 流式抗体通常具备25 test、50 test以及100 test的包装形式。要是你仅仅进行为数不多的几个样本检测, 却购买了100 test的包装, 在开封之后反复多次去使用, 其活性就会出现下降的情况, 到最后很有可能会导致一大半都被白白浪费掉了。
按需购买，哪怕单价贵一点，也比用不完强。
实验前做预实验，别直接上正式样本
这个我真的要吼三遍：预实验！预实验！预实验！
倘若第一次使用抗体, 那么必须开展滴定实验, 不同批次的抗体, 其最佳用量完全不同, 不同浓度下的最佳用量也全然不一样, 说明书所写的“5μL/test”仅仅是参考, 并非圣旨。
我见识过数目众多的人, 按说明书直接添加, 结果不是信号达到饱和状态, 就是根本没信号。进行滴定操作, 只需半小时的时长, 能为你省去后续一个月的因失误而重新做的时间。
最后说点大实话
现在的流式抗体市场卷得厉害, 存在着多种情况, 有国产的, 有进口的, 有代理的, 还有分装的, 其价格范围跨度较大, 从几百到几千都涵盖在内。千万别被“进口”以及“原装”这几个字词给吓唬住, 因为好多号称贴牌的产品实际也就那样。
那些真正能够依靠信赖的, 是在实验室当中被使用过的, 经过验证考量的, 产出过良好数据的那几支。
别问我怎么知道的。
