实验室最近有点邪门。
于上周制成的那批IL - 6, 其标准曲线如同心电图一般, 呈现出歪歪扭扭的态势。师姐只是匆匆瞥瞅了一道, 而后轻轻叹息了一声, 什么话语都不曾吐露。存在的那般沉默, 相较于骂人而言, 更隐隐透着难受之感。我心里明白, 在她内心念头里想着要表达的是 —— 试剂盒大概又一次不能够正常发挥作用了。
做细胞因子ELISA, 这件事, 要说难, 其实并不是特别难, 要说简单, 嘿, 真的不见得就必然轻易能做好。
你有没有碰到过这样的状况呢, 同样的样本, 不同批次跑出来的数值相差了一倍, 复孔之间的CV值飙升到了15%, 你凝视着软件上的数据, 怀疑人生所在, 怀疑移液枪是否精准, 怀疑自己是不是前一晚没有睡好觉。
这玩意儿到底咋选
市面上的细胞因子ELISA试剂盒，多得跟米一样。
关键是——哪个才是靠谱的？
实则而言, 我经历过诸多波折。某次购买了某家的TNF-α试剂盒, 其说明书所描述的极为美观, 提及灵敏度为多少多少pg/mL, 然而检测的结果却是本底高得出奇, 仿若在检测油漆一般。寻求售后支持, 对方声称“亲, 您的操作存在问题哦”。这令我气愤不已, 以至于当场就产生了顺着网线爬到对方那里去的冲动。
灵敏度高有啥用
有些试剂盒，吹得天花乱坠，灵敏度做到小数点后两位。
不过, 实际运用的时候会怎样? 稀释液存在偏差, 样本基质产生干扰, 板子吸附性能欠佳——这些才是真正造成严重问题的关键所在。即便你灵敏度极高, 然而背景噪声要是高于生物信号, 那么一切都是徒劳无功的。
之后我学机灵了, 不再死盯着那个数字疯狂看。真正实用的试剂盒, 是当你添加完TMB显色液后, 注视着孔里呈现的那个蓝色 , 呈从浅至深的变化 , 且均匀 、干净 , 不存在气泡干扰时 , 在那一刻你心里便清楚 , 这盒稳了。
样本类型多咋办
血清、血浆、细胞上清、组织匀浆……不同样本，基质复杂得很。
有一些试剂盒, 其说明书当中写明“适用于多种样本”, 然而当你对血清进行检测时, 回收率仅仅只有60%, 你再次对细胞上清进行检测时, 线性稀释却又不可以, 这实在是非常让人烦闷, 原因是你没办法晓得问题究竟出在何处, 是样本自身存在问题吗? 还是试剂盒的匹配性欠佳呢?
换一个专门匹配你样本类型的，反而省心。
品牌重要吗
这个问题吧，得分人。
罗氏、R&D、Thermo这些大牌子, 的确稳定, 然而价格昂贵。要是你经费充裕, 随意购买无妨, 但假如预算紧张, 国产品牌里像近岸、优宁维、联科生物这些也有表现出色的, 性价比还算可以。
但你得试。真的，得试。
刚开始使用国产某品牌时, 我怀揣担忧拿不准, 心里直打鼓, 没想到得出的结果是, 输出的与进口大牌之间的相关性R²竟然等于0.98。那种感受, 如同中了彩票一般惊喜, 还仿若发现新大陆那般新奇。
批间差到底是咋回事
做长期实验的人都懂，最怕的是啥？
不是一回做不妥, 是你做了三个月, 发觉前两个月的试剂盒, 和第三个月的试剂盒, 标准曲线竟然不一样, 那你前面的数据要如何处理呢, 难道全都作废了吗, 真是让人头疼。
合格的试剂盒, 批次之间的变异系数控制在百分之十以内, 甚至百分之五以内。这一点, 购买之前务必询问。向销售人员索要批次之间的差异数据, 要是拿不到就不要购买。迟疑就会遭受失败。
便宜没好货吗
便宜没好货，但贵的不一定就好。
存有一些进口的试剂盒, 其价格较高是由于关税、渠道以及包装等因素所导致的。在其内部的核心成分方面, 有可能跟国产高端款式是一样的。当然了, 确实存在部分国产的试剂盒质量不行的情况, 比如说抗体的亲和力较差, 包被不够均匀, 检测范围比较狭窄。
因此, 要去考量其口碑情况, 前往实验室群里进行询问, 到知乎、小木虫、丁香通这些平台上去查询查看，不要仅仅瞧官网所吹嘘的内容。
我踩过的坑
有一回，买了某家的IFN-γ试剂盒，价格便宜，发货快。
仅是结果检测范围为15.6至1000 pg/mL，我的样本具有较高浓度, 经过稀释倍数达十倍后方才勉强处于范围内该范围。因稀释倍数较大, 故而误差也较大。在那次实验当中，我进行了三次操作, 然而数据依旧无法令人满意。
后续更换为另外一家, 其检测范围拓展至7.8至2000 pg/mL, 以一次性的方式完成。
所以，买之前看清楚检测范围。别光看价格，别光听销售吹。
售后是隐形门槛
你有没有碰到过, 试剂盒出现了问题, 去找售后, 对方却讲“要不您再去买上一盒试试看”这样的状况呢?
我遇到过一次。
那次我直接把那家公司拉黑了, 能称为靠谱的供应商, 其售后会帮忙分析缘由, 会协助做问题排查, 甚至会重新发放一盒, 并非所有售后皆是如此, 然而一旦你碰到过一回优质的, 便会晓得何为省心。
总结一下吧
细胞因子ELISA试剂盒，说白了就是个工具。
工具行不行, 用过才有定论, 别盲目迷信大牌, 也别一味贪图价格便宜, 要去考量灵敏度、观测检测范围、留意批间差、关注样本匹配度、审视售后态度, 最好是能够获取试用装, 或者寻觅到用过的实验室去打听询问。
千万别一次性屯一堆。先买一盒试试，好用再续。
实验做不准，不一定是你的问题。换盒试剂盒，可能就全通了。
别跟自己过不去。
