参与山羊原代细胞相关工作, 提及难度, 实际并非困难重重。说是轻松容易, 然而上周我却弄破了一瓶对此进行操作。
实验室里的那台倒置显微镜, 我每日都紧盯着瞧, 眼睛都快要视物不清了。山羊的细胞与小鼠的细胞全然不同, 它们更为娇弱, 性子还倔强, 时不时就飘浮起来、蜷缩成一团, 恰似你饲养了一群处于叛逆阶段的少年, 你越是期望它们茁壮成长, 它们越是要对你表现出不满之情来。
事实上, 最开始的时候, 我也颇为迷茫。那是这样一种状况——明明已经依照所有步骤一一去做了, 试剂也并未超出规定的有效期限, 无菌操作同样不存在任何差错, 然而它却只是不生长。你是否清楚那种感受呢? 就仿佛你已然做了全部正确无误的事情，最终得到的结果却依旧是错误的。在科研领域当中, 诸如此类“难以名状的失败”实在是太多了。
原代细胞为啥这么难搞
许多人询问我, 为何不径直去购买商品化的细胞系, 却一定要自己费尽周折地去折腾原代呢?
你仔细去思考一下, 那种经商品化处理的细胞系, 究竟传了多少代? 其基因都已经漂变到何种模样了, 跟最初的组织早就完全不是同一回事儿了。你要是打算去负责弄羊的奶、弄羊的肉、去探究羊的抗病机理这些事儿, 却选用那种传了几百代的细胞系作为依据, 所得到的数据, 你自己发出后能相信吗?
原代细胞并非相同, 它才刚脱离组织, 还携带着那个动物的全部记忆, 其年龄如何, 其营养状态怎样, 其患过何种疾病, 其食用过哪种草。这些信息皆记录于它的基因表达谱当中。这才是真正意义上的生物学。
但是，代价就是难伺候。
起初我着手分离山羊肾细胞之际, 在剪碎组织这个步骤上, 就折腾耗费了半小时。因为剪刀不够锐利锋利, 致使组织块被挤压得稀烂破碎, 出现了大量的死细胞。随后更换了一把崭新的眼科剪, 仅仅三分钟便处理完成, 细胞活性径直直接实现了翻倍。
有些坑，你不踩永远不知道。
山羊原代细胞一般能活几代
这个问题我被问了不下二十次。
说实话, 不存在标准答案, 有的原代细胞传至三代便开始呈现衰老态势, 有的则能够坚持到七八代, 关键在于你采用何种方式进行培育, 每天予以更换培养液、以温和方式进行消化、将细胞密度把控得当, 它便能够陪伴你更长的时间, 倘若你总是三心二意、缺乏持续的投入, 它定会以生长缓慢、形态发生改变、最终甚至不再贴壁生长的状况来回应你。
有一批山羊乳腺上皮细胞, 我养着, 养到第五代的时候状态极为特好, 我还因此得意了一番。然而到了第六代, 一进行消化, 细胞全都飘起来了。那种心情, 该怎么言说呢, 就仿佛你养了一窝小鸡, 眼看着快要长大, 结果却被黄鼠狼在一夜之间给端掉了。
冻存复苏真的靠谱吗
有人说原代细胞不能冻，一冻就废。
我只能说，这句话对，也不对。
重要的是看你采用怎样的冻存方式, 你若使用平常的冻存液, 随意放置到零下八十摄氏度处, 这的确就报废了。然而你要是运用胎牛血清再加上百分之十的二甲基亚砜, 把控降温的速度, 冻存完成然后丢入液氮里面, 复苏呈现出的活性仍旧有超过六成的。
我历经一回, 于复苏之后的次日进行换液之际, 目睹细胞贴附状况甚佳, 且仍处于分裂状态, 就在那个刹那间委实有些许感动。搞科研的人就是这般易于感到满足。
搞科研不就是跟这些破事较劲吗
委实讲, 从事钻研山羊原代细胞好些年了, 最为深刻的体验便是——你必须承认, 它全然不是那种具备标准规格的产物, 它有着自身独特的脾性, 存在状态优良、表现出色的时段, 同样也有消极怠工、表现欠佳的阶段。
你没法像用试剂盒那样，打开就用，用完就扔。
你得跟它相处。
当你为其进行换液操作之际, 它的状态优劣与否, 凭借肉眼观察便可明晰。细胞质当中是否存有颗粒, 细胞边缘是否清晰可见, 折光性是否强烈, 诸般细节均在向你传递它的状况好坏。
有时我会觉着, 做实验跟养育孩子没什么两样。你没法期望它依照你的计划推进, 你仅仅能够顺着它的节奏行事。它在今日不想生长, 你就减少对它的折腾。它在今日状态良好, 你就趁此机会多收获些细胞。
归根结底, 科研的实际性质难道不正是和这些细微之处较劲儿么? 你在这较劲儿中取得胜利, 数据便会显得美观。你在这较劲儿里遭遇失败, 那就再次展开行动。
不管怎样, 我这里存有一批才刚完成分离的山羊原代细胞, 明天就到了该进行换液的时间了。期望它们今日的状态良好。
