说实话，写这个标题的时候我犹豫了挺久。
正由于市面上阐述PCR试剂盒的文章数量极为众多, 随意进行一次搜索, 满眼皆是诸如“十大品牌推荐”“选购指南”此类内容。然而我始终感觉, 这些事物太过……该如何表述呢, 太过正确无误了, 正确到令我在阅读开头之时便能推测出结尾。
所以今天，我打算换个路子。
不给你列参数，不给你做对比表格，甚至不想装得很专业。
想来谈谈那几个, 在这一行待到久了之后, 大家心里都明白却并未言明的情况, 事情。
你确定你买的PCR试剂盒真的“能用”吗？
这个问题是不是很傻？
但是你仔细想想, 好多实验室在进行采购这个行为的时候, 其第一反应往往是去查看价格情况。要是价格便宜, 那就决定购买！要是价格昂贵, 那就直接放弃不考虑！
然后呢？
紧接着便是开展实验直至深更半夜, 那扩增曲线呈现出歪歪扭扭、极不规则的态势, Ct值仿若乘坐过山车一般飘忽不定。你责骂那机器, 你数落那耗材, 你抱怨天气太过炎热……
有没有可能，问题就出在那个你图便宜买的试剂盒上？
有个叫PCR的玩意儿, 它的关键之处就在于两个字, 那就是稳定, 不论你是从事科研工作, 还是进行检测操作, 又或者是开展开发项目, 你所需要的是这样一种试剂盒, 即不管在何时打开盖子时, 其结果大致都是相近雷同的。
价格只是入场券，稳定性才是硬道理。
灵敏度高就一定是好试剂盒吗？
我见过太多人被“高灵敏度”这三个字牵着鼻子走。
居然厂商一宣传“灵敏度比同行高十倍”, 采购单便立刻就签了。然而你仔细思考留意过没有, 灵敏度高至一定的程度, 反倒会引发出一个问题——。
假阳性。
背景噪声, 气溶胶污染, 引物二聚体, 这些东西, 在普通试剂盒里根本不会扩增时呈现不存在的情形, 到了超高灵敏度的体系里, 全都给你放大了, 变为显著存在的状况。
你耗费一周时间所做的那个实验, 最终发觉呈阳性的对照, 全部都是从环境当中的灰尘扩展出来的……
你说你气不气？
因此, 真正知晓门道的人, 在挑选PCR试剂盒之际, 关注的并非“最多能够检测的拷贝数量”, 而是“在确保特异性得以实现的条件下, 能够稳定进行检测的拷贝数量”。
这俩，差一个字，差出来的可是好几周的返工时间。
批间差，才是隐藏的坑
大实验室的朋友应该深有体会。
有一批试剂盒被用光了, 接着去打开下一批, 哎, 是同样的样本, 采用同样的程序, 然而结果却出现了偏差。
你说你怎么办？
到底是需要于起始之处对实验条件展开优化, 还是要将整个体系重新制作一遍, 答案都并非如此, 你能够且仅可寄希望于这一批次之间的差异不要过于巨大。
批间差此物, 厂商不会主动告知你, 你若询问, 他们亦会称“控制于合理范畴内”, 然而何为合理? 你心中之合理与他的合理, 或许全然不同。
因而呢, 要是具备相应条件, 那么最好一次性采购足你整个项目所需要的数量。或者, 挑选那种生产体系稳固、质量控制严谨的供应商。
别等到实验做一半了，才发现自己踩进了坑里。
其实吧，你的样本类型才是决定性的
实验室当中, 最为经常能够听到的一句话乃是, “我们在之前运用某某牌子的时候是不存在问题的呀。”。
然而, 问题出现了, 在此之前所使用的是纯化后的DNA, 而当下你所拿来的却是通过咽拭子、唾液, 甚至是土壤提取出来的核酸。
存在这样的情况, 样本的基质并非相同, 抑制剂的含量并非相同, 使得PCR体系的耐受程度也并非相同。
一个做血液检测的试剂盒，拿去测粪便样本，你猜结果能好吗？
所以选PCR试剂盒之前，先问问自己：
我的样本之中存在着什么, 抑制剂的数量是不是很多, 核酸的浓度是不是很低, 是否需要进行多重扩增?
这些问题，比看参数表重要一百倍。
别把“适配”当成“必须”
有的实验室，仪器是A家的，试剂盒就非得买A家的配套产品。
不是说不好，但很多时候，你只是被“绑定”了。
事实上, 现今诸多通用型PCR试剂盒, 其适配性的表现相当出色。无论是ABI品牌机器, 还是Bio-Rad品牌机器, 亦或是罗氏品牌机器, 运作起来均不存在问题。
关键是，你得自己试。
取若干样品。采用不同厂家所提供的试剂盒去进行一次操作。对Ct值及扩增曲线、熔解曲线等予以对比。如此一来, 哪一个更好, 情况便会清晰明了。
别怕麻烦。做实验，最怕的就是“图省事”。
最后说一句掏心窝子的话
PCR试剂盒这个东西，说到底就是个工具。
工具究竟好不好, 并非取决于它的价格高低, 不是取决于它的品牌响亮与否, 关键在于它可不可以助力你将实验完成, 把实验做出正确结果, 把实验做得快速。
我碰上过有人借助最便宜的试剂盒发表了高分的文章, 还碰到过有人运用最贵的试剂盒折腾了半年却什么成果都没搞出来。
核心是什么？
是你对于自身所做实验的那种理解, 是你针对抽样采集样本的精准把握, 是你心甘情愿为验证以及优化所投入的时间数目。
别迷信品牌，别迷信参数，更别迷信“别人都说好”。
你自己的手，你自己的实验，只有你自己最清楚。
