说起来自己都觉得丢人。
两年的时间完完整整, 两百多只小鼠, 经费高达几十万, 最终拿出来的数据连自己都不敢相信。老板看着那一堆杂乱无章的曲线, 脸变绿了。
那时我并不晓得问题究竟出在了哪里, 认为或许是自身手部颤抖所致, 觉得有可能是孵育时间未能精准卡顿, 臆想也许是洗板之际过于用力, 如此反复折腾历经三个月, 更换了好些操作流程后, 可数值依旧如风筝般飘忽不定。
直到有个师兄过来看了一眼，说：你这试剂盒不对吧？
我当场就懵了。
怎么判断动物ELISA试剂盒靠不靠谱？
其实说白了，就三件事。
瞧批间的差异情况 , 针对同一个批号进行三次测量 , 然而结果却相差诸多 , 得赶快丢弃。这个东西如同购买水果那般 , 在同一箱子里面的水果 , 有的尝起来甜 , 可也有的尝着酸 , 这种情况你会敢去购买不?
瞧一瞧说明书之中所提及的交叉反应率, 倘若生产商连这一项内容都拒绝书写, 那么基本上就能够将其加入黑名单了。
仅是一种土办法, 即取你自身实验室里有着已知浓度的样品去进行测量, 瞧瞧是否能够对应得上, 于此最为简便, 同时也最具效用。
我当时就是第三步都懒得做，想着大品牌总没问题吧。结果呢？
便宜没好货这个道理在试剂盒上特别准
你可能觉得我在说废话。
可是确实, 好多实验室在进行采购操作的时候, 其最先出现的念头便是去查看价格情况。特别是当学生自行去购置试剂盒时, 鉴于预算存在限制, 只要能够节省那就尽量节省下来。而老板, 又不会去管这些细微的环节, 只要批准了就可以了。
然后你就花了半年时间重复一个根本不可能重复的实验。
我计算过一笔账目, 一个符合规范的动物ELISA试剂盒, 带有包被的那种, 一瓶标准品, 一瓶检测抗体, 再加上显色液以及终止液, 整套完整呈现下来成本是客观存在于那儿的。要是你买入价格为两三百块钱的, 讲句不太中听的话, 那极有可能是用一些杂乱的蛋白质掺和上去以此来蒙骗你的。
你以为是检测，其实是在测一堆不知道什么东西的混合物。
动物ELISA试剂盒和人的有啥不一样
这个问题我问过好多人。
实际上核心便是一句话, 动物的样本背景更为繁杂, 不论是血清, 还是组织裂解液, 其中杂乱无章的干扰物质相较人而言多了许多, 倘若你使用人用的试剂盒去检测小鼠、大鼠、猪、牛的样本, 大概率会失败。
因为抗体亲和力不一样，因为基质效应不一样。
所以, 专业的动物 ELISA 试剂盒, 其抗体是专门针对动物种属制作的, 标准品是用动物血清或者组织液配置的, 并非随意取出个什么缓冲液进而稀释一下就大功告成。
靠谱的厂商, 我所见过的, 讲这个关于试剂盒能测的物种, 不能测的物种, 会告知你, 还甚至会给出显示交叉反应的一个表。没写的, 你就等于是认定它如耍流氓那般。
买之前该问供应商哪几个问题
别难为情去问, 花的是实验室的钱, 浪费时间是很亏的, 浪费样品是挺亏的, 浪费感情更是亏上加亏呢。
你直接问：
1. 这个试剂盒的检测范围是多少？灵敏度能到几个皮克？
2. 批间差和批内差的数据能发给我看看吗？
3. 你们有没有做过这种样本的验证？能提供验证报告吗？
4. 标准品是重组蛋白还是天然提取的？纯度多少？
5. 保存条件是什么？有效期还剩多久？
我所经历的最大的坑, 便是未曾询问有效期, 在拿到手之后, 才发觉还有一个月便会过期, 然而, 结果却是在检测到一半的时候就出现了问题, 那种感觉好比是你熬煮了一锅极为出色的汤, 却在最后发现使用的盐是假的。
学会看说明书里的细节
很多人拿到试剂盒，说明书看都不看直接开干。
我理解，都挺忙的。
但存在一些信息是确实必须要看的, 比如说那个所谓的“样本稀释比例”, 其上所写标明是1:2, , 而你却非要采用1:10的比例, 自以为如此这般背景就能够低上那么一些, , 然而结果究竟如何呢? 信号已然消失不见, 最终只是白白忙活一场。
另外还有那个所谓的“孵育温度”, 其中有的所标注的是室温, 而有的所写的则是37度。 你把它放置在4度的环境下度过一夜试试看呢? 等到第二天早上起床进行一次测量, 会发现吸光度就如同根本没有做过一样。
要知道说明书这个事物, 看上去会显得啰里啰嗦, 然而每一句话背后, 都极有可能是存在着有人耗费了好几个月时间摸索得出的条件。
为什么同样的试剂盒不同人测出不同结果
这个问题应该困扰过很多人。
在之后我方才洞察那真相, 除去试剂盒自身现存瑕疵之外！操作之人使用手法的差异程度实在是太大啦！于清洗板子那一刻, 存在着这般状况！有人选用自来水来操作, 有人则选用超纯水来进行！有人拍打板子仅三下, 有人却拍打十下之多！有人添加样本速度极快, 有人添加样本时却极为缓慢！
这些细节累积起来，结果就差好几个数量级。
所以当下我在做ELISA, 标准品必然要做复孔, 样本起码要做两个稀释度, 并非是为了美观, 而是倘若中间哪一步操作失误出状况了, 还能够有个对照以供参考。
有一批试剂盒, 致使我遭遇翻车情况, 之后师兄把它拿到别的实验室进行检测, 检测之后发现, 该试剂盒的供应商早就被同行举报过, 然而我却并不知晓这一状况。
对两年的时长而言, 讲它长吧不算长, 讲它短吧也不算短。然而要是你同样从事这一行业, 理应清楚地知道, 两年时间持续重复出现一个错误所造成的结果, 会是多么令人痛苦呀。
别学我。买之前多花十分钟，问清楚，看清楚，比什么都强。
