昨天整理实验室，翻出三年前的实验记录本。
翻到第三页就笑了。
“试剂盒检测结果全无效，疑似操作失误，待重做。”
那是我头一回接触植物ELISA试剂盒。老板讲挺简单, 不就加样、于合适环境下孵育、洗板以及读数这些事儿嘛? 我把说明书瞧了三遍, 忙活整整一天, 次日发觉OD值通通处于0.1以下。
鬼知道我那时候多崩溃。
为什么你买的植物ELISA试剂盒总是没结果
不是你的问题。真的。别先怪自己手残。
同血清以及细胞裂解液相比, 植物样本存在着显著差异。细胞壁、叶绿素、酚类物质、多糖, 这些成分会在实验流程之中产生干扰。你认为抗体正在进行特异性结合, 然而实际情况是, 它或许正紧紧与叶绿素相结合。
我曾目睹有人运用同一个试剂盒去检测拟南芥以及烟草, 拟南芥所呈现的数据极为出色, 烟草所展现的数据却犹如过山车一般。
同一个盒子里装的试剂，换个植物就翻车。
不是这试剂盒不行, 是你的样本预处理, 根本没顾及目标植物的特性。
植物ELISA试剂盒到底怎么选才对
别只看灵敏度。别只盯着那个数字。
我曾向好多刚开始接触相关领域的人进行询问, 你为何会选择这个品牌? 得到的回应表明“参考文献里其他人所使用的情况”。然而, 你所运用的植物与对方相同吗? 所采用的提取缓冲液相同吗? 样本的稀释倍数相同吗?
不一样。那就别指望结果一样。
去挑选植物 ELISA 试剂盒之时, 首要步骤并非去查看参数条件, 而是着重去考量样本兼容性状况。说明书当中是否有清晰注明“已验证对 XX 植物具备有效性”呢? 要是没有这种明确提示的话, 大概率会把你当作小白鼠来对待的。
第二步, 查看验证物种, 当说明书仅仅记载了小鼠、大鼠, 然而你却打算检测水稻时, 这种盒子大概是不合适的, 植物 ELISA 的抗体多数是依照植物蛋白设计的, 不过许多厂家将动物试剂盒更改标签后就当作植物试剂盒售卖。
骗人的。
植物ELISA试剂盒的样本处理才是真正技术活
我的那位同事老是不停地抱怨, 说他所使用的试剂盒不准确。我仔细瞧了瞧, 他竟然是把植物的叶片直接弄成碎末状后, 就直接往研磨管里面塞进去, 添加完提取液之后进行检测, 结果那个颜色都发生了变化。
在植物组织当中存在的那些多酚氧化酶, 一旦细胞出现破碎的情况, 在短短几秒之内就能够将你所设定的目标蛋白予以氧化。而你所测量的是经过降解之后的片段, 并非是原来的蛋白。
作法正确的是: 在取样之后, 要迅速地进行液氮冷冻, 在研磨的时候, 需要加入PVP或者PVPP来去多酚, 整个过程都要在低温的状态下操作。听起来是挺麻烦的, 不过这一步骤决定了你在后面所有的数据的可信度。
别省这几分钟。
植物ELISA试剂盒的保存和有效期没那么简单
看说明书上写“4°C保存”。信了就输了。
好多试剂盒当中的抗体、酶标液实际上惧怕反复去取用, 倘若你每日开启冰箱门, 前后的温差变动几次, 抗体的活性便会呈直线下降之势, 我做过对比, 同一批号的试剂盒, 分装保存的相较于原管直接使用的, OD值稳定得多了。
另外存有有效期, 不要去相信那个印在盒子之上的日期, 植物ELISA试剂盒的保质期通常比动物试剂盒短, 缘由是里面的某些组分对于植物样本之中的干扰物质更为敏感, 要是你所使用的是快要过期的盒子, 灵敏度下降一半都并不稀奇。
植物ELISA试剂盒到底要不要选贵的
便宜的，不敢买。贵的，买不起。
这是大多数人的纠结。
但我要讲, 价格高的并非必然正确。存在一些大牌的试剂盒情形之下, 其贵重体现在品牌的额外加价以及花哨的外包装上。究其实用在植物样本上的优化状况, 或许反倒比不上一个小型厂家。
怎么判断？看它是否提供免费的样本预测试服务。
那些靠谱的供应商, 会主动这么说, 你把样本寄过来, 我们能够帮你测一批, 看看可不可以做。要是他们敢于做出这样的承诺, 那就表明对这个植物ELISA试剂盒有着足够的信心。
不敢的，你懂的。
写到这里，实验室的离心机又响了。
我抬起头, 看向了窗外, 天色快要变黑了。实验记录本上所记录的日期, 仍然停留在2021年。在那个时候, 我觉得挑选一个试剂盒并非如此复杂, 然而后续才发觉, 自己的认知实际是一堵墙。
当下, 每当有人向我询问推荐哪一个植物ELISA试剂盒时, 我都会首先说道: 先把你所检测的是何种植物, 是哪种组织, 是什么蛋白告知于我。
没有唯一正确的试剂盒，只有最适合你样本的那一个。
