说实话，提到“重组抗体”这四个字的时候，我以前也一头雾水。
不是从事科研工作的, 哪有人会没事整日跟这东西打交道。然而后来, 后来没别的办法, 项目停滞在那儿了, 传统的单抗、多抗, 要么批次间差异大到极点, 要么供货周期漫长到让老板天天因我而瞪眼。那个时候我就在想, 重组抗体究竟是什么玩意儿? 真的会比传统的更具优势? 还是又一个被吹嘘得天花乱坠的概念?
后来硬着头皮试了几家，踩过坑，也捡过宝。
今儿个就要将我这些年来的真切身体感受, 掰开了, 揉碎了来谈一谈。不唱那些高调, 只讲实实在在的话。
到底什么是重组抗体？
别被名字吓到。
简要来说, 重组抗体是科研人员将具有抗体特性的基因序列寻觅出来, 而后放置到一个工程细胞内部, 使得该细胞如同工厂一般依照批量的形式制造抗体。这与传统的运用方式——选取一只小鼠、实施抗原注射操作、进行抽血纯化流程——存在着全然的差异。
所以它的好处是啥？
稳定, 每一批次都像是经由印钞机印制而成那般, 不存在这一批次活性处于高峰状态时, 而下一批次却陡然出现问题, 导致运行不畅的情况。
纯度处于较高水平, 不存在那些杂乱随意的雜蛋白, 背景呈现出干净的状态, 在进行Western blot操作之时, 开展ELISA工作之际, 运用流式方法的时候, 减少了诸多令人头疼不已的非特异性條带。
供应没有限制, 只要细胞没有死亡, 从理论上来说, 想要生产多少就能生产多少, 再也不用向供应商卑躬屈膝地哀求“再多给一些库存”了。
但说实话，也不是没有缺点。
那我为啥弃了传统抗体？
说个真事儿。
有一年, 要去做一项关于磷酸化蛋白的检测工作, 这检测必备一对抗体, 分别是针对总蛋白的以及针对磷酸化的抗体。把传统的单克隆抗体采购回来后, 去检测总蛋白时, 那条带呈现得极为干净, 没有任何杂质干扰。然而, 检测磷酸化的那条带, 却怎么都无法出现信号。如此这般折腾了整整两周的时间, 期间更换了好几个不同的稀释度, 还更换了一抗与二抗的组合方式, 可最终结果依旧毫无用途。而说到底, 最后技术方面给予的支撑表明，“有可能是批次之间存在差异, 你所使用的这批货物跟上次采购的那批货并不相同”。
我当场心态就炸了。
后来呢, 更换了一家从事重组抗体制作的, 其特异性以及灵敏度直接提升到了另外一个层面, 磷酸化的信号最终显现出来了, 且背景干净得如同被清洗过那般。
因此, 自那之后, 我对于重组抗体所持的态度便是, 只要能够采用重组方式, 就绝对不会有丝毫迟疑。
但也不是所有重组抗体都好用。坑，还是有的。
买重组抗体最容易踩的三个坑
坑一：只看价格
便宜没好货，这个道理放在重组抗体上尤其适用。
有部分供应商, 为了将成本压低, 采用大肠杆菌表达系统来制作抗体, 可是大肠杆菌虽确实价格低廉, 然而其蛋白折叠、糖基化修饰与哺乳动物细胞相比差距极大, 所制作出的抗体, 活性或许仅有正常情况的十分之一, 甚至还要更低些。
我曾贪图便宜购买过一家售价二百元的被称作“重组兔单抗”的产品, 用于做免疫组化时, 背景高得犹如泼洒了一盆墨水那般, 信号点根本无法看清。
坑二：忽视验证数据
众多供应商会于详情页张贴一张WB图, 看上去条带既亮且干净, 然而你需明白, 那是他们自行测试的理想状况。
换成你的样品、你的缓冲液、你的实验条件，可能完全垮掉。
于是乎, 我的这番经验可得知晓清楚哇: 于购买之前, 必定得向客服索要那第三方验证数据, 或者起码是他们在不同组织、不同样本之上开展的.test1!测试结果, 如果客服表现得支支吾吾而给不出这些内容, 那就直接更换另一商家。。
坑三：没搞清楚“人源化”还是“鼠源”
重组抗体也有“血统”之分。
假如你要做人的样品, 那么最好选用人源化或者全人重组抗体, 因为其交叉反应少。要是你做小鼠模型, 鼠源重组抗体或许是更合适的选择, 也是更好的解决办法。
有一次见着同事, 买了那种人的重组抗体, 拿去做小鼠组织切片, 做完一看呢结果全都是背景, 就这么白白忙活了一阵子, 一场空。
那怎么挑到靠谱的重组抗体？
说了这么多坑，最后还是讲讲我的筛选标准吧。
其实就三条：
首先, 来看表达系统这一方面哈。优先去选择那种属于哺乳动物细胞的表达系统, 就比如说像CHO细胞这样的。虽说它的价格会相对贵一些, 然而其活性以及折叠状况都是比较可靠的。
第二点, 去查看验证数据, 起码得有在WB、IHC、IF、流式这当中两到三种的应用时候所产生的数据、只往上面贴单纯一张图, 这种情况的直接给pass掉。
第三点, 关注售后情况。真正值得信赖的靠谱供应商, 你倘若发起退还请求, 他便会勇于接纳。要是所呈现的效果未能达到理想状态, 能够免费进行更换或者给予退费处理, 如此这般实在是最令人安心的。
就当下而言, 我最为经常使用的有两家, 其中一家是国产的, 其具备价格实惠的特点, 并且验证数据较为全面；另一家是进口的, 它价格昂贵, 然而却稳定得如同沉稳的老黄牛一般。具体的名字就不再提及了, 以免有人认为我在开展广告宣传活动。
无论如何得记住这么一句话, 要是拿不准, 那就多去问客服索要数据, 因为数据是不会骗人的。
最后说两句
重组抗体这东西，听起来高大上，说到底就是个工具。
工具好不好，上手用了才知道。
别看了我这篇文章就急忙去下单, 也别由于之前有过不好的经历就一辈子避开走, 要多去尝试, 多作对比, 找出最适配你实验体系的, 毕竟, 科研已然够辛苦的了, 别再让抗体给增添烦恼。
没错, 倘若你曾使用过极为得力的重组抗体, 又或者遭遇过某些极为糟糕的状况, 欢迎留下话语——尽管我清楚你极有可能不愿动手打字, 可我依旧期望瞧瞧究竟有多少人与我相同, 遭受过传统抗体批间差的困扰呢。
好了，就这些。下次聊别的。
