在ELISA实验中,洗涤虽非反应步骤,却直接决定结果成败。其核心作用是去除未结合的抗体、抗原及非特异性吸附的干扰物质,确保最终信号仅来自特异性结合。洗涤不充分会导致高背景、假阳性;过度洗涤则可能使特异性复合物脱落,导致信号减弱。因此,准确评估洗涤效果至关重要。
ELISA实验中的高变异系数(CV)是导致灰区过宽的主要原因。批内CV应控制在10%以内,批间CV应低于15%,否则会直接影响cutoff值的稳定性,扩大灰区。
在ELISA实验中,样本中目标蛋白浓度过高可能导致检测信号超出试剂盒的动态范围,出现“钩状效应”(Hook effect),即高浓度样本反而显示低OD值,造成假阴性结果。因此,正确处理高浓度样本是获得准确数据的关键。
细胞换液是指在细胞培养过程中,定期或在特定情况下更换细胞培养基的过程。这一操作对于维持细胞的健康生长至关重要。在细胞换液过程中,避免细胞损伤需要从操作技巧、环境控制和换液策略等多方面进行综合管理。
ELISA试剂盒铺板是指将实验所需的试剂,包括标准品、样本、抗体等,按照特定的顺序和量加入到酶标板(微孔板)的各个孔中,以便进行后续的免疫反应和检测。
夹心法ELISA(双抗体夹心法)是一种常用的检测大分子抗原的免疫分析方法,其核心步骤包括包被、封闭、加样孵育、洗涤、加酶标抗体、显色检测等环节。