二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)活性蛋白Active Dihydroorotate Dehydrogenase (DHODH)

        50µg

         Active Dihydroorotate Dehydrogenase (DHODH)

Organism Species: Homo sapiens (Human) Instruction manual

FOR RESEARCH USE ONLY

NOT FOR USE IN CLINICAL DIAGNOSTIC PROCEDURES

                                                                                      13th Edition (Revised in Aug, 2023)

[ PROPERTIES ]

Source: Prokaryotic expression.

Host: E. coli

Residues: Arg35~Asp392

Tags: N-terminal His-tag

Purity: >80%

Endotoxin Level: <1.0EU per 1μg (determined by the LAL method).

Buffer Formulation: PBS, pH7.4, containing 0.01% SKL, 5% Trehalose.

Original Concentration: 500µg/mL

Applications: Cell culture; Activity Assays.

(May be suitable for use in other assays to be determined by the end user.) Predicted isoelectric point: 9.5

Predicted Molecular Mass: 42.4kDa

Accurate Molecular Mass: 42kDa as determined by SDS-PAGE reducing conditions. [ USAGE ]

Reconstitute in 10mM PBS (pH7.4) to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL. Do not vortex.

[ STORAGE AND STABILITY ]

Storage: Avoid repeated freeze/thaw cycles.

Store at 2-8oC for one month.

Aliquot and store at -80oC for 12 months.

Stability Test: The thermal stability is described by the loss rate. The loss rate

was determined by accelerated thermal degradation test, that is, incubate the protein  at  37oC  for  48h,  and  no  obvious  degradation  and  precipitation  were observed.  The  loss  rate  is  less  than  5%  within  the   expiration  date   under appropriate storage condition.

[ SEQUENCE ]

[ ACTIVITY ]

Dihydroorotate  dehydrogenase  (DHODH)  is  an  enzyme  which  catalyzes  the fourth enzymatic step, the  ubiquinone-mediated oxidation of dihydroorotate to orotate,  in  de  novo  pyrimidine  biosynthesis.  This  protein  is  a  mitochondrial protein located on the outer surface of the inner mitochondrial membrane. As an enzyme  associated  with  the  electron  transport  chain,   DHODH  could   link mitochondrial bioenergetics, cell proliferation, ROS production, and apoptosis in certain cell types. DHODH depletion also resulted in increased ROS production, decreased  membrane  potential  and  cell  growth  retardation.  Besides,  FK506 Binding Protein 8 (FKBP8) has been identified as an interactor of DHODH, thus a binding  ELISA assay was  conducted to detect the  interaction  of  recombinant human DHODH and recombinant human FKBP8. Briefly, DHODH were diluted serially in PBS, with 0.01% BSA (pH 7.4). Duplicate samples of 100uL were then transferred to FKBP8-coated microtiter wells and incubated for 2h at 37℃ . Wells were  washed with  PBST  and  incubated  for  1h  with  anti-  DHODH  pAb,  then aspirated and washed 3 times. After incubation with HRP labelled secondary

antibody,  wells  were   aspirated   and  washed   3  times.  With   the  addition  of substrate solution, wells were incubated 15-25 minutes at 37℃ . Finally, add 50µL stop solution to the wells and read at 450nm immediately. The binding activity of DHODH  and  FKBP8  was  shown  in  Figure  1,  and  this  effect  was  in  a  dose dependent manner.

[ IDENTIFICATION ]

 Figure 2. Gene Sequencing (extract)