前两天有个做检测的朋友问我
我打算购置一个PCR试剂盒, 然而市面上这类产品数量众多得很, 选择通用型的这种做法行得通吗, 它会不会存在不准确的情况呢?
我听完愣了一下,然后笑了。
并非是去嘲笑他所提出的问题显得傻气, 而是这个问题实在是太过具有普遍性了, 这种普遍程度达到了几乎每一个刚刚开始接触PCR这种技术的人, 都会在某一个夜深人静的时候, 凝视着购物车里陈列的几款试剂盒, 陷入发呆的状态。
通用型这三个字,其实很讨巧
你来思考下, 超市里面的那种“通用型清洁剂”, 它能够擦拭诸多东西, 然而擦拭玻璃却比不上专门的玻璃水, 擦拭灶台又不如强力去油剂可以达到更好的清洁效果。
PCR试剂盒也差不多。
所谓通用型, 就是说它得在各式各样的模板上跑得通, 得在各样各类的引物上跑得通, 得在形形色色的仪器上跑得通。这样一种“什么都能够干”的设定, 听起来是相当诱人的。
但问题来了:它真的什么都能干吗?
实验室里的血泪教训
我见过太多人,觉得买了通用型就万事大吉了。
结果呢?
有一些扩增曲线呈现出类似心电图模样, 有一些其重复性糟糕至令人萌生砸机器的想法, 有一些干脆就不出现峰。
最离谱的一回, 有个从事水产品检测工作的家伙, 使用通用型试剂盒怎么都跑不出结果, 换成专用型后一次就出现了峰, 这下可把他给气着了, 于是在群里骂了整整一下午。
但说实话,这不全是试剂盒的锅。
通用型PCR试剂盒到底适合谁?
说实话,这个问题我纠结了很久。
后来我发现,真正用得好的,往往是这几类人:
第一类:刚起步的小实验室。
因预算受限, 且检测种类繁杂众多, 故而绝不可能对每个项目都配备专用试剂。通用型犹如那类被形容为“凡事皆可做”的新晋员工, 虽说并非毫无瑕疵, 然而却具备能够发挥实质作用的能力。
第二类:做科研探索的。
存在这样一种情况, 对于样品里究竟会有什么, 你并不清楚, 并且模板质量呈现出参差不齐的状况, 在这种情形下, 通用型反倒变成了优势——它不挑食。
第三类:做大批量筛查的。
对于某一条曲线与否完美这件事你并不在乎, 你所在意的并非这一点, 而是能不能将“阳”与“阴”进行区分开来。通用型具备速度快以及成本低的特性, 这样的情况是完全够用的。
但如果你是做精准检测的……
比如法医鉴定、病原体精准分型、转基因定量这种,我劝你慎重。
通用型的“通用”是有代价的。
为了兼容各类模板, 它常常会在某些特定模板方面“让步”, 或者灵敏度欠缺一点, 或者特异性微小不够, 或者抗抑制能力匮乏。
这不是偷工减料,是物理定律。
就像你不能指望一双鞋同时适合跑步、爬山和跳芭蕾。
我踩过的坑
前年有个项目,要做土壤微生物多样性分析。
因我贪图省事, 故而直接采用通用型试剂盒, 结果呢接连跑了三批, 然而其所出具的数据均不太对劲, 后来呢更换了针对土壤样本进行优化的试剂盒, 随即问题便被顺利解决了。
我把那批通用型试剂盒, 后来就做了废品处理, 钱花得冤枉, 还耽误了两个月的时间。
所以, 我如今存在这样一个习惯: 不论使用多么优良的通用型, 在首次开展新样本类型的操作时, 必定要先用已知阳性样本去验证一番。
那到底怎么选?
我给的建议可能跟别人不一样:
别只看试剂盒,要看你的样本。
你所处理的样本属于何种类型, 是血液、组织、粪便、土壤, 亦或是植物叶片? 每一种样本当中的抑制物均不相同, 并且对于试剂盒的要求也是不一样的。
别只看价格,要看稳定性。
有一些价格较为低廉的试剂盒, 在十次检测当中会出现八次结果呈现出令人满意的良好状态, 而剩余的两次结果却会使得你陷入对人生的怀疑之中。进行检测时最惧怕的恰恰就是这种被称为“薛定谔的稳定性”的情况。
别只看大牌,要看适配。
你所使用的PCR仪器究竟是何种型号, 你所设计的引物情况又是怎样的, 通用型并非是万能型的, 它是需要借助良好的辅助条件才能够发挥其作用的。
最后说点实在的
有个叫通用型PCR试剂盒的物品, 你若讲它不好, 可实际上它真真切切地解决了好多人“面临用不起专用型”的状况。
你说它好吧,它又确实在一些场景下力不从心。
我所持的态度是, 将其视作一个具备“能够完成八成工作任务”能力的工具, 而剩余的那两成部分呢, 要么自行去优化相关条件, 要么就更换为专用类型的。
别神话它,也别妖魔化它。
它就是个试剂盒而已。