我有个朋友，做免疫荧光的，一天到晚对着显微镜叹气。
并非是实验没办法做出来, 而是数据实在是太难看了, 背光亮得如同白昼一般, 特异性? 那是不存在的呀。
他换了三家公司的抗体，问题照旧。
后来他问我，到底为什么？
我说，兄弟，你选的荧光标记抗体，很可能从一开始就不合适。
这不属个例, 我于实验室晃荡多年之时, 目睹好多人一头扎入“便宜”之坑, 一头扎入“大包装”之坑, 一头扎入“朋友推荐”之坑, 接着便无法自拔。
今天不扯那些虚的，就聊点实在的。
你买的荧光抗体，真的是你想要的吗？
很多人下单的时候，眼睛只盯着价格和货期。
但这东西，真不是买个白菜。
有着荧光标记的抗体, 重点其实就两个方面, 一方面是抗体自身的质量优劣情况, 另一方面是荧光染料的稳定性程度高低。
抗体若是不行, 即便荧光再怎么漂亮, 那也都是徒劳无功。如同你为一个演技差劲的演员, 配备上最为华丽的戏服, 当他登上舞台的时候, 依旧会显得尴尬万分。
我见识过最为离谱的情况, 存在有人贪图便宜去购买未曾验证过的荧光抗体, 而后一旦进行上样操作整个视野当中都是呈现绿色, 根本就没有办法区分究竟是阳性信号还是背景噪音。
你说这实验，还怎么做？
所以，别只看价钱。
先行询问一下: 此抗体开展过哪些方面的验证呢? 免疫荧光法有进行过验证吗? 免疫组化法有进行过验证吗? 流式细胞术有进行过验证吗?
没有验证报告，等于盲人摸象。
标记的染料，决定你的眼睛能看多远
说个真事。
那次, 我自行进行共聚焦操作, 选用了A家的荧光二抗, 其颜色为Alexa Fluor 488。
拍完一看，哇，亮是真亮。
但拍了半小时，信号就开始衰减，越拍越淡。
之后, 更换了一种光稳定性更佳的染料, 在相同的条件之下, 拍摄了长达两小时的时间, 信号依旧十分稳固。
这事儿告诉我什么？
你的实验能够做到多精细, 能够拍摄得多么快速, 能够保存多长时间, 直接取决于荧光染料所具备的光稳定性, 荧光染料所具有的亮度, 荧光染料所拥有的耐淬灭性。
有些染料，像那些经典的老牌子，确实亮，但容易褪色。
有一些新型的, 像是某些公司自行研发出来的带有专利性质的染料, 尽管其名称十分绕口, 然而它的光稳定性极为强大, 强大到了离谱的程度。
别小看这点差别。有时候，数据能不能发高分文章，就差在这里。
交叉反应，这个坑你踩过没有
很多人以为荧光标记抗体买回来直接就能用。
错了。
最烦人的是交叉反应。
你想标A蛋白，结果抗体不光认A，还和B、C、D有反应。
一跑出来，背景花里胡哨的，根本没法看。
尤其是在进行多标免疫荧光操作时, 属于各不同种属来源的抗体被混合到一块儿, 交叉反应无疑就会成为一场灾难。
所以，正规厂家的说明上，一定会写清楚交叉反应性有多低。
别光看宣传，去翻他们的数据，看有没有做交叉反应验证。
没做？那你就做好翻车的准备。
保存和运输，比你想的脆弱得多
荧光抗体怕光，怕冻融，怕温度波动。
这个道理谁都懂。
但实际操作中，很多人收到货往冰箱一扔，几个月后才想起来用。
拿出来一看，荧光信号弱了，或者出现沉淀了。
为啥？因为你反复开关冰箱门，温度波动太大，抗体已经降解了。
存在运输情况, 部分小公司的冷链是在敷衍了事, 冰袋已经融化, 抗体在常温条件下停留长达十几个小时。
这种抗体，你敢用吗？
故而敝人提议, 于购置之际, 率先询问对方所采用之物流方式如何, 其保温举措状况怎样。待收到商品后，即刻于第一时间对其状态予以检查。
别省那点检查的时间，省出来的可能是整批实验的报废。
小众靶标，别指望通用货
有些蛋白，或者磷酸化位点，特别冷门。
你跑去翻大公司的目录，根本没有。
这时候，你就得找那些能做定制荧光标记抗体的公司。
但这玩意儿，水更深。
定制，意味着你要提供抗原、抗体，或者序列。
然后对方帮你标记、纯化、验证。
这流程，快则两周，慢则两个月。
而且价格贵。
但没办法，冷门靶标就只能走这条路。
我知晓有一位师姐, 对着跟神经退行性疾病有关联的难得碰见的蛋白, 前前后后耗费了半年时间, 将标记方案替换了三次, 方才获取到可供使用的抗体。
所以，如果你做的是小众方向，提前做好心理准备和时间预算。
最后一个，也是很多人忽略的
荧光抗体的保质期。
它不是无限期的。
通常标得好、保存得当的，一两年没问题。
但是存在一些抗体, 在出厂之前, 早已放置了长达大半年的时间, 而当到达你手中的时候, 实际上已然是经过了最佳的使用期限。
看批号，看生产日期，问清楚出厂时间。
这是基本功。
不要等到做完了实验, 才发觉数据欠佳, 然后才想到去查看抗体是不是已经过期了。
晚了。
写到最后，我想说，荧光标记抗体这东西，说到底是个工具。
工具好不好用，取决于你懂不懂它。
别把它当成黑盒子，买回来就指望出好结果。
多问几句，多看几遍说明书，多做一次预实验。
比起你花费大价钱去购买一堆不合适的抗体, 进而重复进行无效的实验, 这样要划算得多。
毕竟，实验狗的命也是命，时间和经费也是钱。
