说真的，第一次接触PCR试剂盒的时候，我整个人是懵的。
什么样的荧光定量, 什么样的一步法两步法, 什么样的不同品牌之间的兼容性……你讲一个从事做实验的人, 又并非是从事搞采购的, 哪个人有空闲去研究这些呀。可是没有办法, 项目停滞在那儿, 样本堆积在那儿, 你不进行选择是不行的。
往后我察觉到，多数人与我相似, 压根并非不想做出正确选择, 而是压根不清楚该如何去选。网上那些所做的介绍呢, 要么太过专业以致看不懂, 要么太过像软文所以不敢相信。
那么当下这一篇, 我尽可能以通俗话语表述, 讲述一下我所经历的挫折状况, 以及后续又是怎样挑选到称手的PCR试剂套装的。
为什么有的PCR试剂盒跑不出来？
这个问题，我当初问了好几个人。
有人讲是你操作方面存在问题, 有人讲是你所使用的模板不太好, 还有人讲“你去换一个试剂盒尝试一下”。随后进行了更换, 嘿, 居然真的跑出来了。
不是玄学。
随后, 我认真地对照了成分表, 发觉差别主要存在于两点: 其一为酶的活性, 其二是缓冲液的配方。价格低廉的试剂盒, 为了降低成本, 添加的酶量较少或者酶的活性不足, 一旦你的模板浓度微微低一些, 它就停止工作。价格昂贵的呢? 也并非是越贵就越好, 有些品牌的溢价全都体现在包装以及营销方面, 效果与中档的大致相同。
我所给出的建议是, 不要仅仅去看价格, 也不要仅仅去看品牌, 首先要拿自己最为难以跑起来的样本去进行尝试。能够跑出来结果的, 那便是合适的。
怎么判断PCR试剂盒的灵敏度够不够？
灵敏度这个词，听起来很唬人。
说到底, 关键在于它究竟可不可以检测出极为少量的病毒, 或者是基因片段。你仔细琢磨琢磨, 样本当中原本所含的量就不多, 要是试剂盒的性能还不尽如人意, 那岂不是白白耗费精力了?
我所经历过的坑在于, 存在这样的情况, 有的试剂盒说明书之中写明“检测下限为100拷贝”, 然而我运用标准品进行检测时, 50拷贝同样能够出现信号, 只是曲线的状况不太理想。与之相反的是, 有的声称“检测下限为10拷贝”, 实际检测之后发现, 30拷贝才能够达到稳定状态。
所以别光看宣传。
你倘若确实在意灵敏度, 自行拿经过梯度稀释的标准品去跑上一回, 瞧瞧是哪一个浓度起始时就没有信号了。此办法虽显得土气, 然而却是最为准确的。
不同品牌的PCR试剂盒能不能混用？
这个问题，我以前的同事就干过。
原本正在进行实验, 做到一半的时候, 发现试剂不够了, 于是随手拿了另一个品牌的试剂来补上。那么后续出现了什么情况呢? 后续就是那一批的数据全部作废了。
并不是讲绝对不可以进行混合。然而你得清楚, 各个不同品牌的反应体系, 以及镁离子浓度、pH值都是经过调试好的, 要是混合在一起的话, 极有可能会相互产生干扰。这就如同你把可乐与雪碧进行兑饮, 味道倒也还说得过去, 但若你非要将其与牛奶进行兑混, 那呈现出的画面可就……
所以, 要是你没有进行过验证除非, 那就规规矩矩采用同一家的一整套体系。这样做, 省事, 而且还省心。
买PCR试剂盒，除了效果还要看什么？
很多人只盯着效果看，忽略了其实更烦心的事。
比如交货周期。
那么就是, 急需使用那种情况之下, 它处于断货状态, 不然呢, 物流拖延达三天之久, 样本已然降解之后, 试剂盒方才抵达, 这般状况实在令人崩溃至极。
还有技术支撑。
有些品牌的客服, 当你向其询问一个问题时, 他会给你发送一本说明书。当你再问他这个试剂盒可不可以做某个特殊样本时, 他会让你“建议自行验证”。如此状况着实很让人抓狂。
那几家我当下合作的供应商, 都是有过打交道经历的, 且是确认过响应速度的。出现问题能够即刻解决, 这远比便宜几百块要重要得多。
小厂家的PCR试剂盒值得试吗？
我觉得，值得，但要小心。
为了能够打开市场, 有些小厂家所制作的产品质量真的并非不佳, 甚至在用心程度上相比大牌是有过之而无不及的。这是由于大牌存在吃老本的情况, 而小厂则需要口碑。
然而问题在于, 品质把控无法保持稳定态势。这一回好用, 而下一回便有可能不好用了。你难道能够每次都再次进行验证吗?
那么我的行为方式是, 将小厂所生产的产品用作备选, 或者应用于并非核心关键的项目之上。待其能够保持稳定地供应货物持续一段时期, 口碑逐渐积累形成之后, 再去思量是否使其转正。
最后说几句实在的
那件抉择PCR试剂盒的事情, 往根儿上说不存在标准的答案, 你的样本所属类别不同, 你的实验所具备的条件各异, 你的资金预算也不尽相同。
但有几条经验是我觉得通用的：
别图便宜到离谱的程度。便宜没好货，尤其在生物试剂这块。
别盲目迷信进口。国产的这些年进步很大，有些产品甚至更好用。
再多尝试几个。我所见识到的最为离谱的情形, 乃为存在这样的人, 某品牌一连使用三年之久, 自始至终全都未曾更换过, 然而在进行替换之后却发觉呈现出来的效果更为优渥, 因而懊悔莫及为何没有更早一些去更换。
就这样了哈, 就此打住。但愿你能尽可能少地遭遇些磕绊, 尽早寻觅到称手的那款用于聚合酶链式反应所用到的试剂盒。
