做实验最怕什么？
不是没结果，是有结果但不敢信。
参与ELISA操作的人, 有谁未曾遭遇过好些令人崩溃的时刻呢? 在进行板子洗涤当中, 察觉到洗涤液用到一半而不够了, 获取的标准曲线呈现出如同心电图那般的形态, 最终得出的OD值高低错落——在那一瞬间, 内心着实很想扔下手中的东西然后离开。
可冷静下来想想，真的是操作问题吗？
曾有好多人, 他们把实验步骤记得极其熟练, 将移液枪校准到比实验室里的时钟还要精准, 然而最终结果却糟糕透顶。之后才发觉, 毛病出在起始之时——那盒试剂。
试剂这东西，真的不一样
有人觉得，ELISA试剂嘛，都差不多，哪个便宜买哪个。
从前, 我也是这般去想的, 一直到某次更换了全新的牌子, 针对同样的样本, 施行同样的操作, 然而结果却相差了整整两倍之多。我瞅着那两组数据看了好长一段时间, 内心怀疑自己是不是患上了色盲症。
随后与一位从事研发工作的友人进行交流, 他讲了一番话语, 致使我一直铭记至今: “试剂之内的抗体, 宛如厨师手上的刀具。质量优良的刀具与质量欠佳的刀具, 切割出来的菜品会是一样的状况吗? ”。
为什么便宜货总在关键时候掉链子
灵敏度不够
你费劲心力所提取的样本, 其浓度原本就处于较低水平, 然而最终试剂根本无法将其检测出来, 不仅白白地耗费了时间, 而且还不得不再次去进行操作。
背景高得离谱
空白孔都能读出值来，你告诉我这数据怎么解释？
批间差大
上个月所做出来的结果, 跟这个月所做出来的, 是没有办法进行比较的, 想要去发表文章, 审稿人第一个就不会答应。
这些都是试剂的锅。你操作得再好，试剂不行，一切白搭。
选试剂和选对象差不多
别笑，真是这样。
别看外在瞧内在, 纵使包装极为花哨, 也比不上说明书里那一行写着“检测范围”文字来得实在。
不看承诺看验证。厂家说得好听不算，得看第三方验证数据。
不看价格看成本。便宜货买回来做不出结果，再便宜也是浪费。
此刻我挑选试剂, 首要查看批间差, 接着查看交叉反应, 最终才去看价格, 顺序绝不能错乱, 是这样的情况。
那些年踩过的坑
曾有一回赶项目, 因图省事便一次性购置了十盒同一款式的试剂。然而, 当做到第三盒的时候, 标准曲线居然开始漂动了。于是, 我与厂家展开沟通, 对方声称“我们的产品不存在问题, 是你操作方面出现了问题”。
行，我认。
不过随后更换了一个品牌, 同样的那种操作, 却压根不存在任何问题。你讲这究竟是谁的问题呢?
再有一回, 试剂盒当中的酶标抗体浓度存在偏差, 全部那一整批的实验都宣告报废了。在那段日子里, 我每日都对着实验台发出叹息, 感觉自身整个都被ELISA折腾得已然不似人形了。
怎么避开这些坑
说几个实操经验吧，都是花钱买来的教训。
不要仅仅去看品牌, 大牌子之中存在着低端线, 小牌子里面其实也有精品, 关键在于看这个产品究竟是不是属于他们的主打系列。
在参考文献时寻求支持, 倘若某一试剂频繁被引用, 即可视为其经受住了考验, 对于无人使用的物品, 最好不要充当试验者。
向同行询问, 在实验室群里发出这样一句话“谁用过XXX”, 相较于查看一百条广告而言, 其作用更为显著, 做实验的人是不会欺骗同样做实验的人的。
使用自身的样本去尝试, 千万不要害怕出现麻烦, 先去购买最小的包装, 将其运行一遍, 要是合适了, 再去购买更多, 这样做要比你一次性购买十盒, 之后再进行退货省心许多。
好试剂长什么样
讲真的，好试剂用起来是能感觉得到的。
标准曲线漂亮到令人萌生想截图当作壁纸的念头, 背景干净得仿若那刚擦拭过的玻璃, 样本稀释能够拉开梯度, 不会全部拥挤在一块儿。
最为关键的要点乃在于, 具备高度的重复性, 同一样本, 于今日进行操作与明日开展操作, 所获取的结果基本相近, 如此这般才堪称得上靠谱。
这款我当下正在使用的这个, 已然使用了将近两年的时长, 自始至终都未曾出现过任何状况。尽管相较于其他产品而言, 价格要稍高些许, 然而所节省下来的时间以及精力, 早就足以抵回那高出的价格了。
实验做到最后，拼的是心态
这句话是我导师说的。
他讲, 进行实验好似玩麻将, 在运气欠佳之际别急于去翻本, 要先保持稳定。更换一副优质的牌, 缓缓地打, 总归能够赢回来。
ELISA也是这样。
要是试剂被正确挑选出来了, 那后续的进程便会较为顺利。你所要做的仅仅是专注于进行加样操作、开展孵育工作、实施洗板步骤以及完成读值行为, 完全无需担忧会陡然出现状况或是发生意外。那种内心存有把握的感受, 着实是令人畅快的。
诚然, 我并非自起始便明晰, 所经历的挫折比所开展的试验数量更多, 然而, 逐渐地, 你会发觉, 存在一些钱财确实不可节省, 存在一些流程确实不可省略, 存在一些试剂确实不可随意更换。
最后说一句
下次做ELISA之前，别急着动手，先看看你桌上的试剂。
它值不值得你信任，值不值得你花几天时间去伺候它。
如果不行，就换。
别心疼那点钱，心疼心疼你自己的时间和头发。
毕竟, 当实验无法成功做出之时, 即便摔枪姿态极为帅气, 仍旧无法将内心的极度崩溃掩饰住。 最后有标点符号。
