大鼠原代细胞，能较好地反映体内真实的生理状态，是生物医学基础研究里重要的工具，其分离和培养过程的操作很复杂，对无菌环境以及试剂的要求比较高，掌握规范流程是获得可靠实验结果的前提条件。
大鼠原代细胞分离步骤要点
取材环节要做到快速且准确，进行目标组织的剪切，要剪成一至两毫米的碎块，之后用缓冲液反复漂洗，目的是去除血细胞。处理组织常用酶消化法，比较推荐的是用百分之零点二五的胰酶联合胶原酶，在三十七摄氏度的水浴当中振荡消化三十分钟。终止消化之后要过细胞筛网，经过离心收集沉淀，还要用完全培养基进行重悬，通过台盼蓝染色来统计活细胞的比例。
培养条件如何优化
DMEM/F12常被作为基础培养基 ，添加 10%胎牛血清以及 1%双抗 ，就能够满足多数大鼠原代细胞生长的需求。培养箱参数设定成 37℃ 、5%二氧化碳还有 95%湿度 ，每 2 - 3 天进行一次换液。不同组织来源的细胞存在差异 ，像肝细胞需要额外添加胰岛素 ，神经元则要改用无血清培养基并加入 B27 添加剂。
常见污染预防措施
任何接触细胞的器械耗材都得经过高温高压灭菌处理，操作台要进行紫外照射，且照射时长需在 30 分钟以上。分装和加液动作要在超净工作台内开展，禁止直接朝着瓶口倾倒液体。每一批次的实验都要预留空白培养基用作对照，要是培养液出现浑浊现象，或者 pH 值迅速变黄，那就得马上丢弃被污染的孔，还要对培养箱进行彻底消毒。
活力与纯度鉴定方法
运用0.4%台盼蓝进行染色，再结合血球计数板来计算活细胞率，对于此计算有要求，即初始活力须不低于85%。借助倒置显微镜对细胞形态予以观察，像肝细胞呈现出多角形且聚集成岛屿状这种形态，成纤维细胞呈现出长梭形这种形态。进一步去采用免疫荧光染色的方式检测标志蛋白，比如通过波形蛋白来鉴定间质细胞，经由角蛋白来鉴定上皮细胞。
