第一次拿到这个MK检测试剂盒的那个下午
去年秋天，实验室的冰箱又满了。
夹杂于那些叫不上名的小瓶子当中，外观看起来平平无奇的这个MK检测试剂盒，有着白色的纸盒覆盖外包装，在其封面上印着几个字母——MK检测试剂盒。打开的时候，鼻子嗅到一股凉气，那是从4度冰箱里刚刚拿出来的，洁净的，带着生冷气味的凉气。
说实话，我一开始并没太在意。不就是又一个试剂盒么。
人中期因子到底是什么
经过翻阅说明书之后才明白，这个MK检测试剂盒所检测的是一种被叫做“中期因子”的物质，其英文名称为Midkine，相当拗口呢。
这玩意儿挺有意思，它于胚胎期时极为活跃，就比如说那神经系统生长出来之际都有它的踪迹。然而人成长之后呢？说实话我也不太明晰。资料中讲其与神经存活相关，另外还有一些涉及血管生成的情况。
总归而言，是身体内部的一个信号分子，MK检测试剂盒乃是用于捕获它的，查看它于血清或者组织液当中存有多少，数量增多或者减少均蕴含着奥秘。
检测原理其实没那么复杂
你也许会认为，这一款MK检测试剂盒必定是极为高端、上档次的，其所检测的事物，实在是极其玄乎。然而，实际上，当把它的原理阐述明白之后，却是颇为简单的。
彼时我观瞧之际亦觉困惑，所谓双抗体夹心法，听闻恰似制作三明治，对吧？大致情形为：于板子下方铺垫一层抗体静候，将样品添加进去。倘若其中的MK已然存在，便会被这些抗体牢牢捕获。而后再倒入些许带有标记的抗体进去。二者一旦匹配，仿若钥匙寻得适配之锁。加以清洗，未配对的皆被冲去。剩余之物进行显色。颜色的深浅依据MK的多寡而定。
就这么回事。
多少样本才够用？
做过这批实验后才发现，MK检测试剂盒对样本要求还挺挑。
血清血浆暂且不提，细胞上清同样能够进行检测。然而组织匀浆又如何呢？也是可行的。留意到有些公司所售卖的乃是通用版本，涵盖人的、大鼠的、小鼠的各类。上次隔壁实验室的师弟购置了一盒绵羊的，结果离心管险些出现差错。使用这种试剂盒最担忧的便是样本不相符。不同种属之间存在不通用的情形，将人血清拿去大鼠的盒子里检测，得出的结果必然是个笑谈。
第一次独立操作MK检测试剂盒
那是三月份的事情，师父出国开会了，要我自己包办。
在前一天的夜晚时分，我处于很紧张的状态，整个人难以入眠，对于怎样去加样，怎样来计时，我的脑子当中满满的全都是说明书上边所呈现的步骤。
次日，开启试剂盒，对台面实施消毒，将所有零散物件取出：六管标准品、酶标板条、洗涤液、显色液等等，逐一妥善摆放，告知自己莫要慌乱，依序行事。首先从密封袋中取出板条，按照浓度梯度把标准品加入孔内，五十微升精准无误，此时使用的那支小枪头每次只加一个，手部丝毫不敢颤抖。样品孔先添加样品而后加入稀释液，因惧怕加错且排列杂乱，还专门在纸上绘制了一个板子的图形，每添加一个便标记一个。
37度水浴箱里的那段时间
做完添加HRP标记检测抗体的操作后，随手将膜封好，把物品放置进了水浴箱内。当水浴箱的门缓缓关闭之后，我陡然间感觉周遭特别静谧。此时，只能听到旁边超净台风机发出的嗡嗡声响。
脑子注意力没集中。回想起头一回瞅见这个MK检测试剂盒之际，恰是我念研究生的首个年头。师姐传授我使用方法。她讲你可别因这盒子价格低廉便掉以轻心。一盒好几百块钱的国产的其规模已算节俭的范畴啦。进口的还要更贵些。倘若数据不佳，需重新购置重新开展操作。时间方面投入的成本并不比盒子便宜。我当时还对她拥有的经验满心羡慕。那个时候我甚至于连移液器怎样校准都得从起始之处学起。
洗板真是个体力活
一个小时到了。
将其拿出，把液体弃掉，朝着吸水纸进行拍干。添加洗涤液，使其静置一分钟，而后再甩掉。是重复了五遍还是四遍呢？我已然忘却了。说明书表明为五遍，然而我却怎么感觉做了六七遍。一直洗到最后手都变得麻木了。那个20倍的浓缩洗涤液，需要兑入蒸馏水按照1比20的比例进行稀释，我提前就配好了，不然到跟前肯定会手忙脚乱。要是使用自动洗板机的话会省事许多，可是我们实验室的那台老洗板机老是堵塞，还是手工操作更为稳妥呢。
显色那一步，最刺激
加完底物A和B，各50微升。
在将其放进37度需避光进行孵育之际，我匆忙跑去上了一趟厕所，回来之后站在其旁边静静等候着，彼时看到原本呈现透明状态的孔渐渐开始变出蓝色来，一孔一孔之间其深浅程度并不太一样，那种蓝色看上去令人感觉颇为舒服，恰似小时候画画之时所使用的水彩，当十五分钟的时间一到，我赶忙添加终止液，蓝色瞬间一秒变为黄色，那个颜色的变化速度特别快，第一次观看的时候差一点就没能反应过来。
快快去把酶标仪拿到手，在450纳米的地方读取OD值。屏幕之上的数字一下一下闪烁着往外冒。我的心里思索着，无论结果究竟是好还是坏，总归是已经做完了这件事。
结果怎么判读
结果判定得看OD值，依据标准曲线算出浓度才行，可不是能用肉眼瞎猜的。我们曾买过某牌子的人中期因子ELISA试剂盒，买了代测服务，没出条带却只给了数值，但这样反倒更易于判断。网上有人讲灵敏度的单位不一样，有的是ng/mL，有的是pg/mL，换试剂盒时不留意就会闹笑话。确实像这样，我头一回算的时候差点把量纲搞错了。
准确率问题：别被数字迷了眼睛
由我向供应商发问，询问其准确性究竟处于何种状况，他提及标准品的线性回归R值需大于等于0，990方可。板内孔以及板间孔的变异系数要均小于15%。这般听起来似乎颇为高。然而我忆腾出一件事，在与同行进行交流之时曾听闻，不同的厂家所能给出的灵敏度报告并不相同，存在有的较为保守，有的则显得夸张的情况。有一位师兄讲过，最为准确的做法乃是运用自身的样品去开展一次预实验，仅仅聆听厂商的吹嘘是毫无用处的。
于敏感度以及特异性那边所存在的那些数字，诸如95%，98%，仅作看看便罢，一旦真正到了你的实验当中，影响因素可是多之又多。
常见失误：我的血泪史
有次做出来标准曲线不直，R方很低，急得我团团转。
挨个排查了一番，发觉竟然是标准品没和其他一同进行温育这事！倘若温度之间相差显著过大，就会致使稀释不准确。说明书显著确切写明了“从冰箱取出后需在室温平衡30分钟”，而我那一天由于赶时间，没等足时长就直接开始操作了。还有又一次洗板的力度过猛极大，把板底的抗体给洗得花掉了，导致OD值变得杂乱七八糟毫无规律。另外还有样品加错孔的情况发生。更为离谱荒诞的是有一回居然把终止液当成显色液给加进去了——好在发现得还算早。反正总之这些失败自身本身就是经验。
关于储藏和有效期
当前的MK检测试剂盒稳定程度极高，通常需在2到8摄氏度的环境下进行冷藏，某些产品有效期为6个月，还有些产品有效期更长，放置于冰箱门上不可行，因为开门关门所带来的温度波动有可能产生影响，应尽量放置于冰箱隔层的深处，不要轻易去挪动它，用于分装的组分最好尽快用完，不要反复进行冻融。
实验室里的那些人和事
自从开始用这个试剂盒，实验室热闹了不少。
常来问的是小陈，跑数据时会问有没有参考。我讲数据要自己做分析才称得上完美，R²大于0.99的话建议你自己去证实。我们那群人，有时为准备明天的实验，晚上不睡觉，坐在超净台边，把音乐开得小声，各自做各自的事情。
进行ELISA极为无聊，不停地重复进行加样、洗板操作，加样之后洗板，洗板之后又加样，然而最具趣味的便是洗板以及显色呈现的刹那。那一抹蓝色的出现，是我一整天所期盼的。有人讲我们这些搞实验的人确实很乏味。我却认为，MK检测试剂盒如同一座桥梁，协助我把那些无法看见且触摸不到的蛋白，转变为颜色，再转变为数字，使我能够与它们交流。
为什么要抠细节
有人不理解，不就测个MK嘛，至于这么细致吗？当然至于。
ELISA 这种方法，那可是典型的差一点就会谬之千里。咱们仔细想想呢 ，要是标准品稀释倍数出了错 ，那样本之前所做的一系列工作可就全都白费了。而且呀 ，要是洗涤液浓缩倍数没有准确配制 ，那这方法也是行不通的。这根本就连半定量都没办法做到。我曾经在好多本说明书的注意事项当中看到过这样一条 ，外包装上明确写着 “最终结果乘以 5 才有意义 ” ，这是为啥？因为样本孔里原本的 10 微升样品被稀释成了 50 微升。要是在计算结果的时候忘了乘回来 ，那误差可就大到离谱了。
试剂盒以外的那些事
其实MK检测试剂盒不仅仅是个工具。
你若使用较多，便会渐渐养成某些习惯。于用之前需看好保质期，在开封之后要尽快用完。进行操作之时注意力务必配备齐全，在需要37度恒温箱的条件下一定要提前准备好备用，就算停电也无需惧怕。拆解开板条后没用的要密封并放回冰箱。当更换试剂批次之际最好再度制作标准曲线，以免前后数据无法进行比较。
这些习惯，并非仅仅对这个盒子有作用，你往后使用其他的试剂盒时，也会察觉到，世间之事，无一不是严谨这两个字。
从害怕到上手
现在的我已经教过好几个新来的师弟师妹了。
起初，他们也发懵，不清楚该抉择48T还是96T，顾虑试剂盒所配的试剂不足够，时常询问哪个型号更为划算，并且不晓得样品应放置组织还是上清液。我逐个去教导，以手把手的方式。
寻思着自己当初那会儿不也是这般情况，头一回进行 MK 样本检测之际，心里头特别没底气，台面摆满了东西却不知该如何去做才好，添加剂的顺序、温育的时间都是瞧着说明书一条条去看的，不过这些终究都会是过往云烟。
如果再来一次
要是把我放回到最初开始接触MK检测试剂盒的那一日，我会存有几个提醒。
将所有要用的仪器尽早准备妥当，提前开启37度的恒温箱，切莫静待使用时才发觉温度未达成设定，添加样本的时候要留意时间以及质量情况，处于同一批次试验进行添加操作时，最佳期限最好不要超过5分钟时间，不然开始与末尾的温育时长将会被过度拉开差距幅度，计算最终所获取的结果之际，记得不能遗漏乘以稀释倍数计算步骤，开展标准曲线制作时采用复孔求取平均值方式，相较于采用单孔方式要可靠很多。
此外呐，购买事前可要确切弄明白你打算检测何种种属，是怎样的样本类型，选用国产的还是进口的。毕竟试剂盒不会欺骗人，会骗人的是那些不懂却装作懂的人哟。
MK检测试剂盒，于我的心坎当中，并非仅仅是那一堆，装有抗体的物品，以及微孔板条的事物。
它使我懂得了等待，懂得了面对失败之际不轻易去放弃。那些洗了一回又一回的板子，那些看了一遍又一遍的数字，如今已然成了我生活的一部分。在实验室里历经了好多回加样以及温育的傍晚，外面什么季节发生了变化都毫无察觉。唯有做完了最后一步读取OD值，才发觉窗外天色已然暗了下来。
也许有人觉得我矫情吧，一个试剂说那么多。
对那些始终坚持做研究的人来讲，每一个小盒子所带来的每一回机会，都值得予以认真对待，它是我跟微观世界之间的那条奇妙联系。
