昨天从实验室出来的时候，看了一眼时间，凌晨一点四十。
那惨白一片，在曝光仪屏幕之上，我盯着它，这已是第三十七次了，却是什么都瞧不见，二抗又一次出现问题了。
说真的，那一刻我真想把那管二抗扔进垃圾桶。
二抗浓度越低越好？信了就惨了
有一段时间我总觉得信号越强越好，结果每次都是高背景。
师姐跟我说，你试试把浓度再降一半。
有点儿相信又有点儿怀疑地尝试了一回，知道后续怎样了吗？干净程度提升了许多，随后我制作了一个浓度梯度，发觉我之前全都是依照产品说明书所给出的建议去进行配置的，然而这个二抗实际上能够在那个基础之上进一步下降。
于是可以这么讲，说明书仅仅是供参考的，唯有自己亲自尝试得出的结果才是切实可信的，每一个抗体都存在差异，千万别偷懒呀。
一抗和二抗的种属不匹配，白干三周。
我头一次进行双重染色之际，犯下了一个尤为愚笨的差错 ，一抗之中，其一为源自小鼠的，另一为源自兔的 ，然而结果却是，我把二抗全部弄成了针对小鼠的兔二抗。
那天的双重染色结果，我盯着显微镜看了半小时，啥都没看懂。
会不会存在其他人也有着这般经历呢？白白耗费了一整个三周的时间，最终却发觉从最根本的源头之处就是错误的。
还有就是封闭剂
以前我就随便用5%脱脂奶粉，后来发现背景高的吓人。
被实验老手告知，封闭剂的选择关联二抗的来源，你所使用的二抗是什么，使用该物种的正常血清进行封闭为佳。
换了之后，背景真的降了。
一个让我理解透彻的时刻
那天我看着实验记录本，突然想明白一件事。
一是用来寻觅“那个蛋白”的，然而一本身并不带有颜色。二是专门来“找寻一”的，并且它自身携带着荧光或者酶标记。
一旦这个逻辑通了，所有事情便都顺了，信号放大，原因在于一个一抗能够结合好几个二抗。
因此呀，只要你的单细胞悬浮液与荧光标记搞妥善了，二抗浓度稳定下来了，流式细胞这项的数据并不会特别难做的。关键之处在于得做够充分的准备工作呢。
前些日子，群里头又有其他人在询问相同的问题。哎，我明白那种焦虑烦躁的情绪，毕竟我往昔也是如此经历过来的。
分享这些坑出来，至少让你少走一些我走过的弯路。
