用好了一瓶通用型PCR试剂盒的实验室师兄，笑着跟我说那是“还行”，我问他啥叫还行，他挠挠头讲，“就是用着不会崩溃，然而也并非有多好用。”。
我听完就愣住了。
到底什么样的试剂盒，才算真的好？
通用型PCR试剂盒真的通用吗
这个“通用”两个字，很多厂家写在包装上，实验室里谁都信过。
但它到底通什么？通哪些仪器？通哪些样本？还是通所有引物？
一个试剂盒真的能通吃吗？我越干越不信了。
为什么越通用的东西越不能对付
试剂盒这东西，像你买鞋子。
谁都能穿的大码鞋，然而跑起来却不太合适 ，当初购买是单就“都能穿”而去关注挑选 ，最终走出短短的几步就感觉脚疼发作了。
通用型试剂盒也一样，挑不对，实验耗材得买好几倍的安慰剂。
看准酶，别光看品牌
好的聚合酶，热启动、稳定性高、扩增效率好。
劣质化的酶，你于今日能够达成跑出的状态，到了明日便会呈现出跑得杂乱无章的情形，反复对你进行若干次灭活以及冻融的操作，说不定就会致使其直接丧失功能。
你要挑试剂盒，其实是在挑里面的酶。
不要仅仅只是聚焦于包装，去询问一下对方所使用的是何种酶，是怎样的缓冲体系。要是不存在细节，那便全都是在进行忽悠。
为什么适配性比价格更关键
有人较真:我买便宜的，省钱。
然而，价格较为低廉的那种，需要花费较长的时间去进行调试，才能够与你的仪器相适配，等到那个时候，把时间成本以及人力成本计算起来，其花费足以让你承受不小的经济压力。
那一盒针对多台机器的通用型试剂盒核心所在，是要真的能够适配得上你所使用的特定那台机器才行，可是若在说明书当中寻觅不到与你仪器相对应的型号，那就万万要慎重啊。
我用过的好用试剂盒长什么样
先看组分简单不简单。预混液最好，加上引物模板就能上机。
然后看质控严格不严。好的试剂盒会附质检报告，酶活定义明确。
最后是扩增结果干净。胶图漂亮没有杂带，Ct值稳定不漂。
注意那些没说明书的试剂盒
买回来发现，要自己搜电子版说明书。说明书写得含糊其辞。
别买。谁买谁后悔。
通用型PCR试剂盒选购看什么
一看酶系统，二看适配性，三看质控标准，四看分装包装。
通用型PCR试剂盒的退火温度怎么设
通用型试剂盒一般给个温度范围，55到65摄氏度。
但你不能全信。
需亲自动手去跑梯度，96孔板设定8个不同温度，按照从低至高排列次序依次进行，以此找寻查看哪一个温度下显得最为干净清洁。花费两个小时用来开展梯度相关操作，以便保证后续不至于耗费两周时间去调整参数设置。
灵敏度不如自己实测靠谱
厂家会说检出限100拷贝/反应。
但那是纯质粒。
换成血清样本、土壤提的DNA，表现可能崩掉。
倘若要进行测量，那就开展梯度稀释操作：从十纳克开始，一直到十飞克，观察其倒数第几个梯度能够出现条带。下限达到一皮克便大体合适了。
通用型PCR试剂盒能扩增多长片段
常规加个3kb以内没问题。
打算去跑全长度基因，就是那样子长度在5至10kb的，购买时分需要瞧仔细有没有显示“长片段”这种字眼。
拿普通的扩长片段，结果要是空的。
试剂盒保存与分装注意事项
拿到试剂盒先分装。聚合酶最怕反复冻融。
将2乘以预混液，把它划分成小管，每一个小管都是一次所需要使用的量，在使用的时候解冻一管，使用完毕之后直接丢弃，不要觉得这样做是一种浪费，因为被浪费掉的是试剂，而节省下来的却是时间。
别买那种没阳性质控的
好的通用型试剂盒，会附带明确的阳性质控，方便验证操作。
没有阳性质控的，出了问题你都不知道是试剂不行还是手不行。
通用型PCR试剂盒使用注意
加样一定要在冰上操作。酶娇气，室温待久了可能失活。
对于模板纯度这件事绝不能够有所含糊，一旦260与280的比值并非处于1.8至2.0这个范围之内，那就需要重新进行提取。要是模板糟糕到了特别严重的程度，试剂盒是没办法起到挽救作用的。
通用型PCR试剂盒结果判断
先在胶图之上查看阴性对照是否干净，对于存在杂带的情况，思考一下是否为引物二聚体。
阳性对照跑出来，说明试剂没问题，问题出在你样本上。
目标条带位置跑偏了，大概退火温度要调。
通用型PCR试剂盒价格对性能影响大吗
便宜的能跑出来，贵的可能也跑得差不多。
差别在稳定性上。
价格高的批次之间差异较小，你将这批使用完毕后，下一批次的结果能够与之相对应，而价格低廉的，每一批次都必须重新摸索相关条件，这是颇为繁琐的，是这样的情况。
为什么说通用型比专用型门槛更低
专用型试剂盒针对特定模板，参数调得很死，换模板就废。
通用型宽容度高，换不同来源的样本，基本能跑出来。
很适合刚上手的学生。
我第一次用通用型试剂盒翻车的经历
拿到所谓“通用”的PCR试剂盒，第一天跑阳性对照还行。
冻融了两次到第三天，阳性对照全阴。
一查发现酶早就失活了。
教训就是试剂拿到先分装，别心疼那几管。
通用型PCR试剂盒的误区有哪些
误区一：通用就是万能。
不是的。它能兼容的只是大部分常用模板和仪器，不是所有。
误区二：贵的就好用。
贵的不一定适合你的实验体系和样本类型。
误区三：便宜能省钱。
便宜的反复买，比一次买对的贵的还费钱。
怎么判断通用型PCR试剂盒的真实水平
让它去扩增高GC含量的模板。
GC含量处于较高水平的，平凡的试剂盒根本无法将其扩增出来。能够被扩增出来的，意味着缓冲体系确实针对其进行了优化，敢于标注“通用”字样是有底气的。
还可以拿略带杂质的粗样品跑，不崩就是好东西。
通用型PCR试剂盒厂家推荐怎么判断
瞧瞧对方是不是给出了那批次质检的数据，每个批次的酶活单位究竟是怎样去定义的呀。
不透明的厂家，别信所谓“推荐榜单”。
我踩过的大坑
试剂盒里没有分装，我自己分，枪头没换干净，交叉污染。
整批试剂没法用。
最后的小建议
挑通用型PCR试剂盒，不要看谁吹得猛。
看谁能让你稳定地跑出干净的胶图。
越是你不想花时间优化的，越要拿到手先把梯度温度试好。
试剂盒帮你省时间，不是让你浪费时间的。
用对了，一盒用半年不操心。用错了，倒贴半个月调整参数。
