搞不懂就别搞了
就在昨天，有这样一位从事肿瘤免疫工作的朋友，于半夜时分给我打来了电话，声称他阅读了三篇发表于CNS上的文章，随着不断地阅读，愈发觉得自己手中所拥有的细胞存在问题。“我心里疑惑，自己这个稳转株会不会是假的呀，”他这般说道。
我没法安慰他。
那是由于我清楚他极有可能是正确的，在市面上存在着许多被称作过表达细胞；或这些细胞本身的表达量堪称稀疏，或渐渐培养着就出现丢失基因的状况。这并非单单他一个人所遭遇的困境，而是此行业中太多人同样正在遭遇的挫折。
基因过表达细胞库不是随便养出来的
你必定遭遇过这般情形：好不容易成功实现转染，完成筛选之后，通过Western blot查看，条带淡得仿若从未进食过。你认为是自身操作存在问题，实际上极有可能——你所获取的细胞本身根本就并非一个“库”。
那真正称得上基因过表达的细胞库呀，可不是你于实验室仅仅亲手搓两管质粒，然后进行转染操作，再加上加药筛选这么一番简单折腾就能成就的呢！
它需要：
单克隆筛选（不是pool，是单克隆）
每个克隆验证表达量
冻存备份、扩增、再验证、再冻存
批次间一致性有数据可查
少一步，都不叫库。
为什么你的稳转株总在第三周叛变
这种事情我目睹过好多回了。在开题之际做得相当不错，等到正式展开实验之时，细胞居然不进行表达了。
真核细胞的本能是基因沉默，它对外源基因不喜欢，会想办法把你插进去的那个片段关掉，所以很多实验室自己做的稳转株，传代到第5 - 6代就开始丢表达了。
不是你的错。是细胞太聪明了。
而基因过量表达细胞库的意义所在便是——它将这件事情替你妥善管理好了。每一个批次的细胞均源自同一批被冷冻保存的早期几代，你解冻之后所实行的实验，与上一个人解冻后产生得来的，是同样的事物。
怎么判断一个细胞库靠不靠谱
别信广告，看三点：
它有没有给出单克隆筛选的原始数据？仅仅宣称“我们进行了筛选”是不足够的，总得有图表，得有数据呈现出来，还得有克隆编号才行。
它能不能作出承诺，表达量能保持多少代呢？较差的库，从第10代就开始下降；较好的承诺能维持到20代；真正可靠的会讲“我们建议你每次解冻new大一管，不要传代太多回”。
它究竟有没有开展过功能验证呢？并非仅仅进行一次PCR便称作验证。必须清晰说明该基因过表达之后，其下游通路是否出现了变化，以及表型是否能够对应得上。
价格贵不贵，看你算哪笔账
一管基因过表达细胞库，市价从几千到两三万都有。
当你听闻这个价格时，最初的反应必定是“好贵”。然而，你再去算另一笔账：你自行做一个稳转株，将时间成本、试剂成本以及失败概率全部纳入考量，全部加进去之后，做三次倘若能成功一次那就算是运气颇佳了。并且即便你做出来了，所得到的那个，还未必会有他人专业制作的那般稳定。
实验做到一半细胞出问题，要重做，那损失才是真的大。
别让自己困在“我可以用但我不确定”的焦虑里
搞科研最惧怕的是什么呢？是你耗费了一整年的时间，去获取数据，撰写文章，然而审稿人询问“你所研究的这个细胞其表达量究竟是否稳定”时，你却根本无法给出答案。
旨在解决这一焦虑的是基因过表达细胞库，它能使你手中所拿到的细胞，成为一个具备可追溯性、可重复性、可被验证特征的事物句号。
它不是万能灵药，但它至少让你少摔一跤。
那个在深夜给我打电话的朋友，后来终究还是买下了。他跟我讲，细胞送达的当日夜里，他跑完了一块胶，瞅见那条带粗得简直超乎想象，他坐在实验室之中，傻乎乎地痴笑了足足十分钟。
他说：“我终于可以安心做后续实验了。”
这句话，大概就是所有坚持做基础研究的人，最想要的东西吧。
