我也不知道怎么就写起了这个
几天前, 实验室之中的师弟, 又弄摔了一个管子, 口中骂骂咧咧, 着手清理桌面, 还说道, 这质量差的试剂盒, 为何每次进行加样时, 都会出现粘壁的情况。
我没吭声。
其实心里在想——你那是没挑对东西。
投身实验工作长达六年之久, 经手触摸过的PCR试剂盒, 往少了说也有几十种之多。其中既有价格昂贵到使人揪心的进口产品, 又具备价格低廉到令人忐忑的国产类别。然而, 如实说来, 绝大多数实验室最终始终难以回避一项抉择: 通用型PCR试剂盒。
为什么？
缘故在于省钱, 缘故在于省事, 缘故在于不想每一次更换一个模板就必定得重新去做条件优化, 令人烦闷与否?
通用型PCR试剂盒到底是啥玩意儿
也就是说, 是那种所谓的“万金油”试剂盒。无论你要去扩增何方基因 , 无论你面对怎样的模板 , 拿过来就能够得以利用 , 再不用费心神去调试镁离子浓度 , 也无需纠结于调节退火温度到让你有种想砸机器的冲动。
它舍弃了些许极限性能, 对特别GC含量极端的模板可能会有些费劲, 然而却换来了你一天能进行八板实验的效率。
这买卖，划算。
为什么有人死活不买通用型
你知道吗，实验室里有个奇怪的现象。
越是才刚开始走入门道的, 就越迷信那种“专用试剂盒”，认为专用这俩字听起来就特别厉害, 这情形就如同购买手机的时候非得要最高配置的那种一样。
那那些混了整十年的老油条怎么办呢? 抽屉里头经常预备着一两盒通用型, 手头不管是啥样的样本拿过来就着手干。
我知晓一位师姐, 处于一种做qPCR做到对人生都产生怀疑的状态。而后她更换了一款通用型产品, 按照她的说法来讲: “以往的时候我是在为试剂盒服务, 如今则是试剂盒在为我服务。”。
话糙理不糙。
通用型能扛住哪些坑爹模板
别以为通用型就是“样样通样样松”。
我尝试过运用它去扩增那种GC含量高达70%的序列, 就是那种不管怎样去调整条件, 都无法出现非特异性条带的情况。
结果呢？
条带干净得我自己都不敢信。
显然, 有时候也会出现搞砸的状况, 比如说, 模板的质量糟糕透顶——就是那种存放了三年之久、经历了十几回反复冻融的DNA, 就算是本领超凡的神仙在此, 恐怕也无力回天。然而, 这可不是试剂盒所引发的毛病, 而是你所提供样本自身存在的问题。
怎么判断一个通用型试剂盒好不好
讲真，没啥太玄乎的标准。
你选用实验室里最差劲的模板去进行尝试, 那种是其他人做不出来, 被丢在冰箱角落布满灰尘的。倘若这个东西能够出现条带, 那就可以了。
莫轻信那些宣传册当中所吹嘘的诸如“专利技术”、“革命性配方”之类何物, 仅是去瞧三点:
首先, 存在重复性情况, 将同样的模板去做三遍, 倘若Ct值漂移超出0.5的, 那就不要去触碰了。
其次, 是耐受性, 特意增添更多的抑制物进去, 诸如残留的乙醇、蛋白污染这类, 瞧瞧它能不能承受得住。
其三, 温度宽容度, 去尝试将退火温度设定为比原温度低两度以及比原温度高两度的情况, 查看最终结果是否稳定。
实验做到最后，拼的是稳定，不是偶尔的超常发挥。
我踩过的一个坑
曾有一回贪图那便宜, 购置了个全新的品牌, 其包装精致美妙, 然而价格仅是大牌的三分之一。
第一次用，跑出来的电泳图漂亮得我想挂墙上。
第二次用，有个孔没出条带。以为是加样失误。
第三次用，同样的样本，三个复孔两个有条带一个没有。
气得我直接打客服。客服说：您是不是操作有问题？
呵呵。
之后更换了一家称得上靠谱的供应商, 尽管价格贵了整整一倍, 然而却再也未曾出现过这类令人头疼的状况。以一年来进行计算, 由于减少了重新开展实验所省下来的时间, 早就把那部分差价赚回来了。
通用型试剂盒的隐藏优势
你清楚吗, 通用型存在一种众多人尚未察觉到的益处, 那种益处是适宜团队协作。
实验室当中, 有好几个人共同开展项目, 其中, 有人致力于植物DNA相关研究, 有人专注于动物组织方面工作, 还有人投身于细菌菌落的研究。每个人的手部操作速度存在差异, 加样的习惯不尽相同, 并且, 就连所使用的移液器品牌也各不一样。
此时采用通用型, 无需大家分散开来去逐个另行费尽心思地摸索各自所需独特条件。数据归集到一处放置, 其具备的可进行综合比较衡量的特性也更为突出。
我见过因为试剂盒不统一，两个组互相怀疑对方数据造假的事。
价格到底差在哪了
市面之上, 通用型PCR试剂盒的价钱, 有着从几十块钱一盒的情况, 也有着到几百块钱一盒的状况, 均是存在的。
你问我贵的有必要吗？
我的答案是：看你的容忍度。
要是你的实验能够允许时不时出现失误、允许重新去做, 那么价格低廉的那也是可以使用的。然而要是你所操作的是临床样本、亦或是发表文章时的数据必须要能够经受得住质疑, 那么倒不如不要去节省那几百块钱。
真实的差距常常并非处于“能够扩出来”这般的层面, 当下, 随便一个试剂盒都能够实现扩出来, 然而, 却是在于“每一次都能够扩出来”这样的层面。
最后说点实在的
挑通用型PCR试剂盒这件事，说难也难，说不难也不难。
请你从市面上常见的两三款当中选取拿回来, 运用你自身的样本, 借助你自身的仪器, 通过你自己的手去运行一遍。究竟谁稳定谁不稳定, 数据将会发出声音来表明。
别光看别人推荐，别只看评测文章（包括我这篇）。
实验室的活儿，做过才算数。
终究说来, 你的检测数据正等待于那里。并且, 致使你能够心无旁骛去开展实验而无需忧心的试剂盒, 是值得为此耗费些许时间去寻觅一番的。
