我一直觉得，搞细胞实验的人，骨子里都有点强迫症。
不是贬义。真的。
像我, 将目光锁定在一管人主动脉平滑肌细胞上, 能够持续发呆长达十分钟之久。那脑海之中究竟在思索着什么呢? 思索的是它究竟有没有处于一种类似“跳动”的状态。并非是真正意义上那种明显的跳动, 而是那种情况, 当你把它放置于显微镜之下的时候, 看着它缓缓地舒展开展, 恰似一小片叶子于微风之中翻转了一回身子。如此这般, 你便会知晓, 它是存活的。而且活得万分认真。
说回正题。
为数众多之人在刚开始接触HASMC之际, 都会陷入懵懂状态。究竟这一事物是用于何种用途的? 我将其购置回来后, 该如何进行培育? 是培育数日后便会死亡吗? 为何其他人培育的却生长得那般良好?
它不是什么“万能砖”
好多人认为, 只要属于平滑肌细胞, 那就全都大致相同。从血管当中弄下来的, 从肠道当中弄下来的, 仿若都能够勉强拿来用。别瞎扯了, 朋友。主动脉就是主动脉, 它是血管系统里最为“强硬”的那一部分。血管壁有三层, 中膜全都是它。它承担着收缩、舒张的职责, 对血压进行调控, 宛如一个从不休止的肌肉泵。
但它的脾气，也大。
倘若你将其当作平常细胞来培养, 它变脸的速度可比翻书还要迅速。要是你换液稍微慢那么一点儿, 它就会以死来给你看。倘若你传代推迟了一小时, 它瞬间就会步入衰老状态, 把一张蜡黄的脸呈现给你, 从此再也不想有所动弹。
到底怎么伺候这位“爷”
我所见识到的最为离谱的操作究竟是什么呢? 有那么一个人, 拿到了HASMC，紧接着就直接使用常规DMEM, 添加了10%的胎牛血清, 随后把它放进培养箱里, 整整三天都不去管。到了第四天打开一看, 细胞全部都飘起来了, 宛如一小锅馄饨般。他居然还感到纳闷: 难道是细胞自身存在问题吗?
不是细胞有问题，是你没读懂它。
人体主动脉部位的那种平滑肌细胞, 其性质娇贵, 然而却并非是那种矫情的类型。它所需求的事物实际上极为简单: 需要专门用于平滑肌细胞的培养基, 切不可偷懒而使用通用的货品。血清的浓度方面, 也不能随意添加。它偏好待在并非那么拥挤的场所, 一旦传代密度超过了80%, 它便会开始呈现出皱眉头的状态, 情绪变得不开心, 进而出现分化情况, 最终失去其应有的功能。
还有啊, 千万别老是用胰酶去浸泡它。一旦消化的时间变长了, 它表面的那些受体就会被全部啃得一点都不剩了。而你正在进行的那个实验, 还能够准确无误吗?
总有那么几件小事，让人深夜破防
我曾经有个实验，做了三个月，一直卡在细胞不收缩这个点上。
实施电刺激却未得到反应, 施加药物刺激同样没有反应。差一点我就认为细胞株购买出现错误了。后来在某一天的半夜时分, 我突然想到, 是不是培养基当中缺少了某些东西呢? 查找相关文献, 修改配方, 重新培养出一批, 进行刺激——它收缩了。
那一瞬间，我差点哭出来。
真的, 从事搞科研工作的人, 在深夜出现破防的那些点是相当奇特的。并非是论文遭遇被拒的情况, 也不是数据造假而遭受责骂, 而是当你精心养了一群细胞后, 你每日持续给它们进行换液操作, 就如同伺候祖宗那般小心翼翼, 最终它居然给你反馈回来一个信号, 什么信号, 就是: 嘿, 我仍旧活着, 我还在开展工作干活。
别让它“变脸”
还有个事儿，很少人跟你说。
平滑肌细胞存在着两种表型, 分别是收缩型与合成型。你从组织当中刚刚取出来的那种状态, 为收缩型状态, 它具备能够干活的能力, 拥有能够收缩的特性, 从而可以让你于实验期间观察到真实的生理反应。然而一旦你进行传代操作, 历经两代三代之后, 它便会逐渐发生变化, 小心翼翼地悄然转变为合成型。继而开始疯狂地进行增殖, 大量地分泌细胞外基质, 表面上看起来生长态势良好, 可实际上已然“叛变”了。
你拿它做实验，还能信吗？
因此, 要是你所开展的实验要求其维持功能, 那就尽可能选用低代次的。别心存不舍, 应当更换时就要果断更换。
那些你在百度搜不到的“潜规则”
论坛上有好多人问，HASMC究竟可不可以冻存? 可以的, 然而复苏后的头两代, 先别着急去用它。要让它缓缓, 把状态找回来。就如同人一样, 坐了一趟长途飞机后, 还得倒一倒时差。
另外, 千万别进行反复的冻融行为。培养基的情况也是如此。一旦经过一次加热, 之后再放回去, 等到下次再次使用时, 里面所包含的活性因子早就彻底死亡了。
最后想说点别的
实际上呢, 存在这样一种情况所谓人主动脉平滑肌细胞, 它可算是一种浓缩呈现。你要是越发想要对其实施控制的话, 它反而愈发不会依照你的意愿行事。你必须顺着它固有的特性来做, 给予它一定的空间, 付出一定的耐心。随后哪一天, 你不经意之间感受到, 实验进展顺利了, 数据也稳定下来了。
那种感觉，比发一篇高分论文还爽。
写到这里，突然想到冰箱里还有一管细胞该传代了。先撤了。
