前几日, 有一位从事科研工作的朋友, 跟我发起了吐槽, 声称他们所做实验的数据, 始终处于飘忽不定的状态, 其重复性糟糕到了极点。我随意地问了一句: “你们使用的是何种抗体? ”他刹那间愣了一下, 说道就是普通的单抗呀。我未作声, 心里暗自思忖, 也许问题正是出在这个地方。
真的，有些时候我们太迷信“精准”了。
总感觉那种像单克隆抗体似的, 能够一枪精准命中一个目标这般的玩法才是正确的道路。然而现实的情况又是怎样的呢? 实际当中, 生物体向来都并非呈现出线性这一状态, 蛋白质同样不是仅仅处于一个平面之上的单一静止位点模样, 而非像有这般一个点。它们是具备立体形状、动态特征又会上进行相互的交联缠绕然后再由缠绕经过程序化指令促使其折叠进而还会发生变形的复杂物质。你却使用一把仅仅只有一颗子弹可发射出来的枪去射击一个不但会移动而且还会改变自身外形的靶子, 如此状况下能够击中目标那才叫怪事。
这就说到多克隆抗体了。
为什么多克隆抗体能识别更多？
说白了, 多克隆抗体, 乃是一群抗体所形成的混合物。并非是一个抗体祇认一个位点, 而是许多抗体共同认同的是在一个蛋白之上的不同位点, 对吗?
你试想一下, 蛋白质会折迭成为各种各样的形状, 在这些形状里, 存在着一些表位是隐藏于内的, 而另外一些表位则是暴露于外的。单克隆抗体仅仅能够识别其中的一个表位, 要是万一这个表位由于某些具体的原因而被遮挡住了, 或者其结构发生了改变, 那么它就无法识别出来了。然而多克隆抗体却并非如此, 在这边无法识别的情况下, 在那边或许仍然能够识别。这就如同是有一大群人从不同的角度去看你, 总归会有一个人能够将你辨认出来。
就免疫学层面而言, 多抗乃是在给动物注射抗原之后, 于血清当中进行纯化而得来的, 此过程会生成针对抗原上不同表位的形形色色的抗体, 故而多抗的“视野”更为宽广, 能够捕捉到的信息数量更多。
但我也得说句实话，这种“广谱”有时候也是把双刃剑。
多克隆抗体真的能解决重复性问题吗？
这个问题存在着相当的复杂性, 确切来讲就是, 多抗自身批次之间的差异较为显著, 不同批次所引发的免疫反应有可能存在不同之处, 进而致使不同批次的多抗性能存在着波动现象, 这实实在在是一个问题。然而从另外一个角度进行审视, 如果所使用的是同一批次的多抗, 那么它在同一个实验体系当中的表现实际上是颇为稳定的, 因为它采用的是“群狼战术”, 不会由于某个单一表位出现变动就丧失功效。
我存在一位从事 WB（即 Western Blot）相关工作的友人, 往昔运用单抗之际, 每一回更换全新的批次, 就如同在开箱盲盒一般。往后, 更换了一批质量颇高的多抗, 所出现的问题显著减少了许多。他这般表述说道：“宁愿获取一个能够稳定开展工作的多抗, 也断然不要一个时而灵验时而不灵验的单抗。”。
当然这不是说单抗不好。各有各的用处。
多抗在哪些场景下更有优势？
多抗可结合抗原之上的多个表位, 从而形成更大的复合物, 进而沉淀效率更高, 此为免疫沉淀（IP）实验中的情况。单抗有时因仅结合一个表位, 致使沉淀效果不够理想。
对变体或者修饰蛋白予以检测, 蛋白于翻译之后进行修饰, 又或者存在不同的剪接变体, 单抗有可能识别不出来, 然而多抗由于可识别多个区域, 大概率能够认出其中的一部分。
抗体诊断试剂的研发工作。众多酶联免疫吸附测定试剂盒所采用的是多克隆抗体, 鉴于其具备更高水平以灵敏程度, 能够实现对于更低浓度抗原物质的检测识别。
识别天然构象, 天然蛋白折叠较为复杂, 部分表位在变性之后便消失不见, 多抗因含有针对天然构象的抗体, 于此方面具备天然优势。
然而还得讲, 究竟是要挑选多抗, 还是单抗, 这得依据你自身的具体要求来判断, 不存在绝对的优势与劣势之分, 仅仅存在合适与否的区别。
挑选多克隆抗体有什么门道？
要说实话, 在市场当中多抗的产品质量处在参差不齐状态。针对同一个抗原而言呵, 不同公司制做出来的多抗或许会有着极大差异。那该怎么进行挑选?
观免疫原, 所采用的究竟是全长蛋白, 还是短肽呢? 通常来说, 全长蛋白相对更为优良, 缘由在于其涵盖了更多的表位。
看纯化方式。抗原亲和纯化的多抗比蛋白A/G纯化的要好得多。
查阅验证数据, 最好具备免疫组化、蛋白免疫印迹、免疫荧光等差别的多种应用方面的数据, 而非仅有一种。
参考有人使用过, 且在可信度较高的期刊上刊发了文章, 这般情况下, 这个抗体通常不会太过糟糕。
审视供应商的声誉, 存在这样的情况, 有些开展多种抗病业务的规模较小的公司, 所生产产品果真难以令人满意, 然而诸如一些知名品牌的大型厂商, 其质量把控相对有着更为严格的规制。
最终来讲, 购买抗体跟购买股票类似, 存在一定的风险, 然而好的公司及优良的产品能够降低了风险。
如何保存和使用多克隆抗体？
这个问题可能被很多人忽略了。
多克隆抗体相较于单克隆抗体而言, 显得更为脆弱, 这是由于它涵盖了不同种类的抗体分子, 其中部分 IgG 亚类自身就存有一定的不稳定性, 一旦在保存过程中没有得以妥善处理, 它的活性便很快会消逝不见。
对其作出分装的操作, 在拿到抗体之后, 要马上进行分装, 以此来避免出现反复冻融的情况, 这属于最为基础根本的事项。
浓度, 通常而言多抗于实验过程起作用时所采用的浓度范围是在0.5至2微克每毫升之间, 然而确切的浓度数值要依据具体所开展的实验以及该项实验所使用的抗体自身情况来确定, 存在这样一种情形就是当浓度过高的时候反而会引发并非特异性的结合现象。
缓冲液, 多抗针对pH是比较敏感的, 缓冲液, 多抗针对盐浓度也是比较敏感的, 不同的实验, 那是需要用不同的缓冲液的, 千万不要以为有一种配方它是万能的。
有效期方面, 多抗于4°C的情况下, 能够保存数周直至数月的时间。长期保存的话, 必须置于-20°C或者-80°C。并且需要留意的是, 不可放置在具备自动除霜功能的冰箱内, 因为温度出现波动会致使抗体活性遭受破坏。
往昔有个实验室, 我忽地忆起, 将多抗置于冰箱门上, 每日频繁操作开关, 历经一月之久, 抗体遂失效, 一管好抗体就此白白遭浪费。
这多克隆抗体此物, 讲复杂实则不算复杂, 它乃是大自然给予我们的一种“多角度”解决办法, 在单抗被神化的当下, 我们好像忘却了, 免疫系统自身便是一个多克隆系统, 任何病原体侵入, 身体所产生的皆是一群抗体, 也就是多克隆抗体。
这也许能够表明, 于应对繁杂问题之际, 具备多个角度、多靶点的那种策略通常会比仅仅单一精准的策略更具成效。科学是这样的情形, 生活同样是这样的状况。
好嘞, 讲了这般许多, 实际上就是想要表述出一个意思, 不要小瞧多种抗性, 它并非那般尽善尽美, 不过在好多场景状况之下, 它有可能是更为优良的选择。
