妈的，做实验的人谁没被试剂盒坑过？
你岂会觉得购置个专用试剂盒便一切顺遂无虞进而不再烦忧? 然而每次更替一种样本类型都得再度下单, 经费消耗得比夏季冰棍融化得还要迅速快捷。实验室的师姐去年购买了一个宣称“超灵敏”的专用盒, 无奈更换一条引物便无法正常运行, 气得她险些将PCR仪给砸坏了。
说真的，通用型PCR试剂盒这个东西，以前我是不信的。
老是感觉“通用”意味着“凑合”, 任何事物都能扩展就等同于任何事物都不精通。一直到被强制去做了长达三个月的对比实验, 这才发觉——有的刻板印象, 就是要用来打破的。
通用型到底能不能打？
先不扯理论，说点实在的。
通用型的PCR试剂盒, 确切的说, 是一套扩增体系, 它能够适配多种模板, 适配多种引物, 适配多种退火温度。听起来好像不存在什么技术含量? 然而, 真正好用的那种通用盒, 其缓冲液, 其酶, 其镁离子浓度都经过了无数次优化。
我见识过最为夸张的实例, 存在这样的情况, 有人运用通用盒同时去扩增细菌16S, 同时还去扩增真菌ITS, 并且还扩增人类线粒体DNA, 此三种反应面临的条件完全相同, 最终全部都跑出了亮带, 专用盒能够达成这样的效果吗? 简直是白日做梦。
关键是，很多实验室根本不需要那么“专”。
常常进行的基因检测, 以及病原筛查、转基因鉴定, 其使用的模板通常就是那几种类型, 也就是血液、组织、植物叶片、细菌菌液。你能确切地告诉我, 究竟是哪种模板提取出来的DNA, 其差异大到必须得更换试剂盒才行呢?
通用盒具备的最大价值, 并非是“什么都能够进行扩展”, 而是在于“你并不需要每一次都去调整条件”。
省下的钱够买好几台离心机
算笔账吧。
存在一个专用的试剂盒, 其具备50次反应, 价格处于350至600之间, 价格并不固定。有通用型的一款试剂盒, 反应次数同样是50次, 价格在150到250的区间。难道你会认为两者价格只差一倍吗? 并非如此, 当你进行扩增不同样本的操作时, 专用试剂盒有可能针对一次实验, 就要入手两三种才能满足需求, 而通用型试剂盒只需要一管就能够完成全部流程。
有个我的朋友, 在检测公司工作, 那朋友每月要跑5000个反应。后来换成通用盒之后, 一年节省了差不多将近四十万。居然有四十万这么多, 这足够给实验室装上两台新风系统再加上一台冷冻研磨仪了。
况且通用盒的稳定性能着实并非不佳, 当下主流品牌所推出的通用型产品, 其保质期一般在18个月至24个月范围, 只需于4度的环境下进行储存便可。那专用盒又如何? 存在一些情况是必须要在-20度的条件中存放的, 一旦在运输过程里出现融化的状况那就报废了。
为什么还有人说通用型不好用
说实话，不是通用盒不好，是很多人不会选。
有些通用盒, 便宜得离谱, 酶活低得可怜, 其扩增效率, 还比不上自己配的Mix, 出现这种情况。还有些所谓“通用”者, 实则是将各组分浓度调整得特别高, 结果导致非特异性条带遍地都是。
真正好用的通用盒，你得看这几点：
酶是哪些类型的？热启动还是常规？有没有校正功能？
缓冲液配方是不是针对高GC和低GC都优化过？
有没有做过多种模板的兼容性测试？
不要轻信广告, 要相信数据。让生产厂家给出几个你经常会使用的模板的测试成果, 这可比任何东西都更具说服力。
什么时候该坚持专用盒
也不是说通用盒万能。
倘若你所进行的是具有高度特异性的检测, 像是单碱基突变检测, 又或是甲基化分析, 亦或是某些扩增难度极大的重复序列检测, 在这种情况下, 千万别为了节省那点费用而心疼, 因为专用盒自有其存在的缘由。
但是呢, 存在这样一个情况, 就是大部分的实验室, 在其中约90%的PCR需求条件下, 根本是无法达到那个相应级别的。
常态下的克隆操作, 菌落进行PCR过程, 按常规方式鉴定, 就连荧光定量这一操作, 通用盒都足以应对全部这些情况了。
一个真实的实验对比
我去年帮人做过一个测试。
用同一批模板, 这一批模板包含大肠杆菌DNA, 还有小鼠基因组, 以及水稻叶片DNA, 另外还有人的全血DNA。分别使用三个品牌的通用盒, 且使用两个品牌专用盒用于针对细菌和哺乳动物。扩增的目标片段长度在从200bp到2kb这个范围之间, 且长度并不相等。
结果呢？
通用盒A：所有模板都扩出目标条带，无非特异条带。
通用盒B：水稻和人的样本有点弱，但调整退火温度后好了。
通用盒C：翻车了，大肠杆菌都没扩出来。
专用盒：当然都扩出来了，但价格是通用盒A的2.8倍。
结论？好用的通用盒，确实能打。不好用的，别碰。
说白了，就是别被营销牵着走
众多厂家的宣传话语方式, 是要使你产生“专用的才专业”这样的感觉, 然而实验室并非是秀场, 实验能够做出来, 数据是可靠的, 成本是可以控制的, 这才是最为重要的常理。
日后你若遭销售推荐高价特殊盒, 要记着询问一句: 你们的普通通用盒是否同样可用? 倘若他们表现得含糊不清, 那你便了解答案了。
究竟而言, PCR它实际上, 就是那么一锅子, 里头加了酶以及原料的化学反应。那锅子, 菜品, 火候要是都对头, 不管是何种肉, 都是能够给炖得稀烂的。通用型其所遵循的也就是如此这般的道理。
别迷信专用，别低估通用。省钱不丢人，浪费才丢人。
