公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
商品属性:
产品名称
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规格
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货号
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M-MLV 4 Two-Step RT-PCR Kit逆转录两步法通用试剂盒
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RT体系20ul×50次/PCR体系50ul×80 次
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P-PR1133
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存储条件:-20℃保存两年。
制品说明:M-MLV 4 是通过基因重组技术改造,在大肠杆菌中表达纯化得到的高温反转录酶,去除RNaseH活性。可在42℃-65℃条件下
合成第一链cDNA,具有灵敏度高,特异性高,热稳定性高和半衰期长的特点。聚合能力强,具有更强的延伸能力,可用于较长的
cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。PCR使用2× Xerox PCR MasterMix扩增,扩增产物为平端可直接连接到本公司的
TOPO系列载体中。本试剂盒含有从RNA到cDNA,以及PCR扩增cDNA的全部试剂。
产品特点:
1. Anchored Oligo(dT)18设计独特能锚定mRNA Poly(A)+ 的5′端区域,退火位点锚定,特异性高,保证cDNA 合成效率和成功率
2. 可用Random Primer(N9)或基因特异引物(GSP)合成第一链cDNA;
3. 合成片段≤15kb;
4. 适用范围:
cDNA 文库构建、引物延伸、3′和5′ RACE. 高拷贝、低拷贝基因检测。
高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板。
操作步骤:
为方便保存和运输本产品所配 Random Primer(N9)和 Anchored Oligo(dT)18 均为干粉,使用前需用 60ul H2O(RNase free)溶解,具体体积参见产品标签。
第一链cDNA合成。(以20 μl反应体系为例)
1.加入
2.轻轻混匀 如用Anchored Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP),50℃孵育30min。(注:根据具体实验情况,可50℃孵育时间为5min-30min) 如用Random Primer(N9),25℃孵育10 min,50℃孵育30 min。 对高GC含量或具有复杂二级结构的RNA模板,可选择55℃孵育30min.
3. 85℃加热15 min失活M-MLV 4
PCR 1.PCR体系(以50μl反应体系为例) 建议取1/10-1/5 体积(2-4μl)的反转录产物作为PCR模板。
2.PCR 循环
注意事项:
1.避免RNase污染。
2.为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。