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商品属性:
产品名称
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规格
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货号
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Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer
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100ml
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P-PR1332
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第一部分、制备 Western Blot 杂交蛋白样品
1. 对于培养细胞样品(0.5~10×106 个):
(1). A: 非磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中,加入蛋白酶抑制剂混合物 A ,使其最
终浓度为 1×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液,加入 2.5μl 蛋白酶抑制剂混合物 A,混合均匀,待用。
B: 磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 WB Super RIPA 裂解液中,加入蛋白酶抑制剂混合物 A 、磷酸酶抑制剂混
合物 B 、磷酸酶抑制剂混合物 C 各 2.5μl,使其最终浓度为 1×。如 250μl WB Super RIPA 裂解液,加入 2.5μl 蛋白酶
抑制剂混合物 A、2.5μl 磷酸酶抑制剂混合物 B 、2.5μl 磷酸酶抑制剂混合物 C,混合均匀,待用。
注意:加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂后的 WB Super RIPA 裂解液可于-20°C 保存 2 个月,性能不会有下降;加入 Benzonase
核酸酶至终浓度为 0.25 U/μl,可有效降低样品粘度提高蛋白提取效率。
(2). 离心收集细胞,弃上清。加入 250 μl 上述配制好的裂解液,枪头或旋涡振荡混合均匀。冰上放置 30min。
(3). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。
2. 对于组织样品:
(4). 组织用研钵(或匀浆器)研磨充分至细小颗粒。
(5). 按照每 10 mg 组织加入 250 μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当增加裂解液,如果需要高浓度的蛋白
样品,可以适当减少裂解液的用量),冰上放置 30min。
(6). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。
(7). 提取完蛋白后可利用 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。如蛋白提取过程中加入了 Benzonase 核酸酶
消化核酸后,样品可以直接 NanoDrop 测定吸光值进行蛋白相对定量。
第二部分、制备 Co-IP/IP 蛋白样品
1. 对于培养细胞样品(0.5~10×106 个):
(1). A: 非磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 Co-IP/IP RIPA 裂解液中,加入蛋白酶抑制剂混合物 A,使其最终
浓度为 1×。如 250μl Co-IP/IP RIPA 裂解液,加入 2.5μl 蛋白酶抑制剂混合物 A,混合均匀,待用。
B: 磷酸化蛋白的提取:在使用前数分钟内向 Co-IP/IP RIPA 裂解液中,加入蛋白酶抑制剂混合物 A 、磷酸酶抑制剂混合
物 B 、磷酸酶抑制剂混合物 C 各 2.5μl,使其最终浓度为 1×。如 250μl Co-IP/IP RIPA 裂解液,加入 2.5μl 蛋白酶抑制
剂混合物 A、2.5μl 磷酸酶抑制剂混合物 B 、2.5μl 磷酸酶抑制剂混合物 C,混合均匀,待用。
注意:加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂后的 Co-IP/IP RIPA 裂解液可于-20°C 保存 2 个月,性能不会有下降。
(2). 离心收集细胞,弃上清。加入 250 μl 上述配制好的裂解液,枪头或旋涡振荡混合均匀。冰上放置 30min。
(3). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。
2. 对于组织样品:
(4). 组织用研钵(或匀浆器)研磨充分至细小颗粒。
(5). 按照每 10 mg 组织加入 250 μl 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当增加裂解液,如果需要高浓度的蛋白
样品,可以适当减少裂解液的用量),冰上放置 30min。
(6). 样品裂解后,13,000 rpm 离心 5min,取上清,即为所提取蛋白。
(7). 提取完蛋白后可利用 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。如蛋白提取过程中加入了 Benzonase 核酸酶
消化核酸后,样品可以直接 NanoDrop 测定吸光值进行蛋白相对定量。