公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！
商品属性：
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| Max65反转录酶(Max65 RTase) | 10KU | P-PR2530 |
| Max65反转录酶(Max65 RTase) | 50KU | P-PR2530 |
描述：
Max65 反转录酶 (Max65 RTase)通过 M-MuLV RTase 体外进化而得。该酶不仅具有 RNA 依赖 性的DNA 聚合酶活性，还具有 RNaseH 活性。与野生型 M- MuLV RT 相比，该工程化酶具有显著改善的热稳定性、扩增稳健性、高合成速率。Max65 RTase 能够在宽范围温度（37~65°C）下，进行可重现的 cDNA 合成。
组分
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名 称 10ku |
50ku |
| Max65 RTase (200U/μl) 50ul |
250 μl |
| 5×Max65 RTBuffer 0.4ml |
1.8 ml |
储存：置于-20°C 可保存3 年，避免反复冻融。
单位定义：
以 poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在 37°C 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。
酶储存液：
20 mM Tris-HCl ，pH7.5 ，100 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.1% Tween20, 50%Glycerol。
使用方法
1. 根据 RNA 种类配制引物模板退火体系加入模板 RNA:
or Total RNA 1 pg~5 μg
or poly(A) RNA 0.1 pg~0.5 μg
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加入逆转录引物: |
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or Oligo(dT)23 (50pmol/μl) |
1 μl |
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or Random Hexamer(100pmol/μl) |
1 μl |
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or Gene-Specific Primer (10pmol/μl) |
1 μl |
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dNTP Mixture (10 mM each) |
1 μl |
RNase Free H2O up to 14.5 μl
2. 向上述退火 RNA 中加入酶与 Buffer
5×Max65 RTBuffer 4 μl
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RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.5 μl |
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Max65 RTase |
混合均匀后，放置在 PCR 仪上进行反转录反应37°C 5 min（短引物配对）
50°C 10 min（高效逆转录）
65°C 5 min（长 cDNA 的逆转录）
85°C 5 min（失活反应）
注意：65°C 的逆转录反应是非必须的，可以省略。对于>4000nt的 cDNA，或含有高 GC 含量的 cDNA ，推荐设置此步骤。
3. 反转录所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于-20°C。
4. 其它注意事项：该酶可与Taq DNA 聚合酶组合，用于 One-Step RT-PCR，推荐的 RT 温度为 50-65°C，RT 时间为 5min ，酶的参考用量为：终反应浓度 1U/μl。
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