动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒
产品简介：
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离
心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞
中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用
于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
产品组成：
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在
室温下离心。
1.样品的处理：
a、细胞：取 1×106 -1×107 个悬浮培养细胞，12000rpm 离心 1min 收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理，再
用预冷的 PBS 吹打成细胞悬液，然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞，尽量除去上清，加 200ul 溶液 A，振荡至彻
底混匀。
b、组织：组织量不宜过大，一般不要超过 25mg，可以使用匀浆器匀浆，最好用液氮研磨成粉末状，再用预冷的
PBS 或无菌水充分悬浮，然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞，尽量除去上清，加 200ul 溶液 A，振荡至彻底混匀。
向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，55℃放置 15min。
加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml )，充分颠倒混匀，55℃水浴消化，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，
一般需要 1-3 个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全
为止。 消化完全的指标是：液体清亮及粘稠。
加入 200ul 体积溶液 B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于 75℃15-30min，沉淀即会消失，不影响
后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致堵塞
吸附柱。
加入 200ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都
加入吸附柱中。
12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)， 12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸
附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，
否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
10. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置
5min，12000rpm 离心 2min。
11. 可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。
注意事项:
试剂盒拆封后，RNase A 和蛋白酶 K 需放置-20℃保存。
样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。
如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率：洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响，若需
要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围)，pH 值低于 7.0 会降低洗
脱效率。
保存条件：
室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期 12 个月，2-8℃保存时间更长。
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